Praktiká 5ZS enterobacteriaceae

1. Praktiká 5ZS enterobacteriaceae • Enterobacteriaceae – charakteristika, štruktúra, typy ochorení, odber materiálu – E. coli, Proteus sp., Klebsiella sp • Mikroskopický dôkaz – E. coli podľa Grama, - dôkaz púzdra K. pneumoniae podľa Burriho • Kultivačný dôkaz – E. coli a K.pneumoniae na krvnom agare a Endovej pôde, - plazivý rast P. mirabilis – Raussov fenomén • Biochemický dôkaz - Enterotesty, - vyhodnotenie Enterotestu E. coli, Kl. Pneumoniae a P. vulgaris., - opakovanie biochemická pôda Hajn • Sérologický dôkaz – dôkaz antigénnej štruktúry neznámeho kmeňa – použitie polyvalentných a monovlaentných sér – sklíčková aglutinácia

2. G- aeróbne paličky • 1) Fakultatívne anaeróbne fermentujúce paličky:Enterobacteriaceae - E. coli, Salmonella, Schigella, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Klebsiella, Proteus, Morganella, Providencia Vibrionaceae - Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas Campylobacter, Helicobacter • Najrozsiahlejšia, najheterogénnejši skupina medicínsky dôležitých baktérií • 27 rodov,102 druhov (95% medicínsky významných patrí do 25 druhov) - odlíšenie na základe DNA homológie, biochemických vlastností, sérologických reakcií, ATB citlivostí • Bežne prítomné v prírode (pôda, voda, rastliny) súčasť normálnej flóry čreva. • Obligátne patogénne(Yersinia pestis), podmienečne patogénne (Klebsiella, E. coli, Proteus) • Prenos zo zvieraťa (Salmonelly), od človeka - nosiča (S. typhi), endogénna infekcia (E.coli)

3. Miesta infekcie • CNS - E. coli • IDC - Klebsiella, Enterobacter, E. coli • Septikémia - E. coli, Klebsiella, Enterobacter • GIT - Salmonella, Shigella, Yersinia, E.coli • IMC - E. coli, Proteus, Providencia, Klebsiella

4. Fyziológia a štruktúra • G- paličky, obvykle pohyblivé (bičíky)- okrem Klebsielly, netvoria spóry, fakultatívne anaeróbne, nenáročné nutričné požiadavky, biochemicky aktívne, kataláza +, oxidáza -, cytochromoxidáza COX - = dif.dg.od ostatných G - paličiek • Skvasovanie laktózy + alebo – (patogénne Salmonella, Shigella, Yersinia, a Proteus neskvasujú) rezistencia na žlčové soli (Salmonella), prítomnosť púzdra (Klebsiella) - dif.dg v rámci Enterobacteriaceaei • 3 skupiny antigénov: • - somatický O antigén - najdôležitejší antigén bb. steny, termostabilný, LPS, zložený z 3 súčastí - O polysachrid, kôrový polysacharid a lipid A - s endotoxínovou aktivitou • - púzdrový K antigén - termolabilný, skrížene reagujúci s protilátkami proti iným baktériám. U Salmonella typhi sa nazýva Vi antigén. • - bičíkový H antigén - termolabilný, podlieha antigénnym zmenám

5. Laboratórna diagnostika • rastú dobre na neselektívnych médiách • Selektívne média na odlíšenie patogénnych - laktóza negatívnych kmeňov Salmonella, Shigella • Biochemická identifikácia – Hajnov test, Enterotesty – súbor biochemických testov • Sérodiagnostika – odlíšenie antigénnej štrukktúry – Salmonelly, Shigelly, E.coli • Interpretácia výsledkov – vo vzorke zo stolice – Salmonella, Shigella, Yersinia – patogénne, ostatné enterobacteriaceae – podľa stavu eubiózy, pri premnožení - z materiálov za fyziologických podmienok sterilných : moč – IMC, ascendentná infekcia, krv – najčastejšie etiol. agens, rana, spútum – v dostatnočnom množstve, TT,TS - monokultúra

6. Hajn – šikmo naliata, tuhá červená pôda. Obsahuje tri cukry – glukóza, sacharóza, laktóza. Zožltnutie pôdy znamená pozit. skvasovanie.. Pôda obsahuje soli Fe, baktérie tvoriace sírovodík spôsobia sčernanie dolnej časti pôdy. Baktérie, ktoré tvoria plyn, spôsobia trhliny, bubliny v pôde. Pôdu očkujeme kľučkou, naočkujeme vždy iba jednu izolovanú kolóniu.

7. Šikmá časť – aeróbne prostredie, laktóza negatívne bakktérie – neskvasujú – alkalické, červené Kolmá časť anaeróbne prostredie enterobaktérie skvasujú – kyslé – žlté, alebo H2S - čierne 1 negatívna kontrolka 2 Ps.aeruginosa : nefermentujúca G- palička 3 Shigella sonnei: H2S - negat., plyn – negat., TSI – kyslé/alkal 4 Salmonella typhi: H2S – pozit., plyn –negat., TSI – kyslé/alkal 5 Escherichia coli: H2S – negat., plyn - pozit., TSI – kyslé/kyslé 6 Proteus mirabilis: H2S – pozit, plyn - negat., TSI – kyslé /kyslé

8. E. coli • Prítomná v GIT • vyvoláva - endogénne infekcie po zlyhaní imunitných bariér, z fyziologickej flóry- bakteriálnu sepsu ( z fokusu v močových cestách alebo GIT najčastejší G- vyvolávateľ sepsí), IMC ( väčšina ambulantných infektov, z GIT, špecifické sérotypy viažúce sa na epitel), - gastroenteritídy – EPEC, EIEC, ETEC - neonatálnu meningitídu - hemolyticko uremický sy – EHEC – O:157, H:7 • Vytvára komplex početných O-somatických, H- bičíkových a K - púzdrových antigénov.

9. E. coli

10. Stena močového mechúra s.adherovanými escherichiami

11. E. coli

12. E.coli Hemolýza (KA) okolo kolónií je častá, nehodnotí sa ako významný diagnostický znak

13. p • Endova pôda.

14. Klebsiella • Opúzdrená – mukózny vzhľad kolónií, zvýšená virulencia, nepohyblivá • Klebsiella pneumoniae – pneumónia u pacientov, ktorí nie sú schopný vykašľávaním vyčistiť aspiráty z ústnej dutiny. Nekrotické deštrukcie alveolárnych priestorov. Sangvinolentné sútum. Infekcie rán, mäkkých tkanív a močového traktu • K. rhinoscleromatis - skleróm • K. ozaenae – atrofické ochorenie nosovej sliznice

15. Klebsiella sp.

16. Burriho metóda na dôkaz púzdier • Na podložnom sklíčku sa urobí suspenzia vyšetrovanej kolónie a destilovanej vody • K suspenzii sa pridá kvapka tušu a urobí sa tenký náter • Preparát sa nechá uschnúť a fixuje sa teplom • Potom sa dofarbí kryštálovou violeťou, veľmi opatrne opláchne vodou – ponoriť do kadičky-, nechá odkvapkať a prezerá pod imerziou

17. Púzdra • Extracelulárne štruktúry obaľujúce baktérie, pevne priliehajúce k bb. • Polysacharidové ( len B. antracis – polypeptidové) • Nástroj patogenity – antifagocytárne vlastnosti, bráni vstupu antibiotík, má funkciu adhezínov • Niektoré baktérie sú vo forme opúzdrených aj neopúzdrených kmeňov (hemofilus influenzae)– opúzdrené sú virulentnejšie • Púzdro sa môže v starých kolóniách strácať, alebo ho neopúzdrené kmene môžu získať transdukciou z opúzdrených

18. Klebsiella pneumoniae

19. Klebsiely a escherichie I

20. klebsielly…

21. Proteus • Pohyblivá G- baktéria, Raussov fenomén • P. mirabilis – infekcie močového traktu, produkujú ureázu ( rozklad urey – močoviny, zmena pH, alkalinizácia, podpora tvorby kamienkov a toxicita pre epitel • Proteus vulgaris,

22. Proteus mirabilis

23. Proteus mirabilis, P. vulgaris (dolu) RAUSSOV FENOMÉN

24. Proteus

25. Kultivácia • E. coli na Krvnom agare –šedavé kolónie bez hemolýzy • E. coli na Endovej pôde – vypuklé kolónie s kovovým rastom • K. pneumoniae na KA – lesklé mukózne ťahavé kolónie • K. pneumoniae na Endovej pôde – ružové kolónie bez lesku • Proteus mirabilis – plazivý rast, Raussov fenomén – koncentriký rast od jedinej kolónie

26. Sklíčková aglutinácia • Na podložnom sklíčku – suspenzia s FR • 1) Suspenzia + kvapka polyvalentných sér • s + poly ABC = aggl+ S+ poly DEF = aggl– • 2) Suspenzia + kvapka monovalentných sér • s + mono A = aggl.+ s + mono B = aggl – s + mono C = aggl.– • Výsledok – testovaný kmeň je typ A

27. MikroLaTest Identifikácia Klebsiella pneumoniae – Enterotest + /- + - - +- + + + + + + + + + + /+

28. Kampylobaktery

29. Campylobacter Čiarkovité , G-, pohyblivé, 11 druhov ,7 poddruhov Vyžaduje mikroerofilné prostredie, teplotu 42*C, prechádza filtrami - selektívne vychytávanie při izolácii Campylobacter jejuni – gastroenteritída, u pacientov so zníženou imunitou –hypogamaglobulinémia, zníženou aciditou žalúdočnej tekutiny. Infikuje sliznicu jejuna, ilea a colon, ktorá je edematózna, krvavá, tvorba krýpt, abscesov.Infiltrácia do lamina propria. Enterotoxín, cytoptický toxín, endotoxín. Hydina, potraviny neutralizujúce pH redukujú inf. dávku. C.coli - gastroenteritis, C. fetus – septikémia, artritída, tromboflebitída, meningitída Lab dg kultivácia na selektívnych pôdach, mikroskopia, biochemická identifikácia., Th.: ERY

30. Campylobacter jejuni

31. HELICOBACTER

32. Helicobacter • Špirálovité paličky, G-, v súvislosti s B gastritídou, žalúdočným a duodenálnym vredom., príp. Ca – Gastrospirillum hominis • Patogenéza – produkcia ureázy – vytvára oblak amoniaku, ktorý chráni baktériu před účinkom žal. kyseliny, - pohyblivosť, - tvorba mucinázy – prienik baktérie do mukóznych vrstiev – adherencia – prichytenie baktérie na intracelulárne spoje – zápal s infiltráciou mononukleárov v lamina propria. Uniká prítomným protilátkam igA – svojou lokalizáciou v mukóze. • Neexistuje zvierací rezervoár – prenos interhumánny • Th. ATB . Bizmutové soli, nitroimidazol a amoxicilin alebo TTC

33. H. PYLORILaboratórna diagnostika sa robí z bioptického materiálu odobratého sondou zo žalúdočnej sliznice. Transport v 20% roztoku glukózy. Biopsia sa na sterilnom podložnom sklíčku pomocou dvoch ihiel rozdelí na maličké kúsky.

34. Helicobacter pylori

35. Helicobacter cinaedi

36. Salmonella, shigella, • Mikroskopický dôkaz - Gramovo farbenie Salmonella sp. - Gramovo farbenie Haemophilus influenzae • Kultivácia - Salmonella, Shigella, dezoxycholát, krvný agar • Biochemické vlastnosti - fermentácia cukrov - Hajnova pôda a Enterotesty: Salmonella, Shigella, • Widalova reakcia - diagnostické možnosti brušného týfusu

37. Mikroskopický dôkaz • Mikroskopický dôkaz - Gramovo farbenie • Salmonella sp. Shigella sp.

38. Kultivácia G- paličiek - Salmonella, Shigella, • Kultivácia - Salmonella, Shigella, • krvnom agare - G - palička, šedavé kolónie neodlíšiteľné, • na Endovej pôde- E.coli laktózu skvasuje - ružové kolónie, Salmonella laktózu neskvasuje - žlté, priesvitné - s tvorbou sirovodíka, • Shigella - laktózu neskvasuje, bez sirovodíka, • na DC - dezoxycholátovom agare - selektívna pôda - rastie Salmonella (laktóza negat. so sírovodíkom) a Shigella (laktóza negat. bez sírovodíka). - E. coli nerastie

39. p • kolonie gramnegatívnych paličiek na KA a Endovej pôde

40. Salmonela Endo

41. Šikmá časť – aeróbne prostredie, laktóza negatívne bakktérie – neskvasujú – alkalické, červené Kolmá časť anaeróbne prostredie enterobaktérie skvasujú – kyslé – žlté, alebo H2S - čierne 1 negatívna kontrolka 2 Ps.aeruginosa : nefermentujúca G- palička 3 Shigella sonnei: H2S - negat., plyn – negat., TSI – kyslé/alkal 4 Salmonella typhi: H2S – pozit., plyn –negat., TSI – kyslé/alkal 5 Escherichia coli: H2S – negat., plyn - pozit., TSI – kyslé/kyslé 6 Proteus mirabilis: H2S – pozit, plyn - negat., TSI – kyslé /kyslé

42. Salmonella typhi

43. Widalova reakcia - diagnostické možnosti brušného týfusu • Kultivácia (priama diagnostika) krvi (7.-10. deň), stolice (od 2. týždňa), kostnej drene, moču (od 3. týždňa) a zisťovanie aglutinínov v sére - Widalova reakcia (nepriama diagnostika) - protilátky proti O a H antigénom S. typhi - štvornásobný vzostup titra protilátok - akútne ochorenie alebo - vyhľadávanie nosičov - skrížená reaktivita, dostatočne vysoký titer • Znalosti klinického obrazu a patogenézy - Ochorenie začína ingesciou baktérií.Inkubačný čas je 1-2 týždne. Pri väčšom inokule sa môže vyskytnúť akútna gastroenteritída. Baktérie prenikajú cez mukózu tenkého čreva ( invázia) endocystózou do submôukózy. Množia sa v submukózze a sú vychytávané do lymfatických uzlín, kde sa množia v makrofágoch, dostávajú sa do krvi (perzistujúca bakterémia) a orgánov RES a ostatných orgánov (hemorhagie, kožná rozeola, orgánové komplikácie)

44. Znalosti klinického obrazu a patogenézy - Ochorenie začína ingesciou baktérií.Inkubačný čas je 1-2 týždne. Pri väčšom inokule sa môže vyskytnúť akútna gastroenteritída. Baktérie prenikajú cez mukózu tenkého čreva ( invázia) endocystózou do submôukózy. Množia sa v submukózze a sú vychytávané do lymfatických uzlín, kde sa množia v makrofágoch, dostávajú sa do krvi (perzistujúca bakterémia) a orgánov RES a ostatných orgánov (hemorhagie, kožná rozeola, orgánové komplikácie)

46. Widalova reakcia - diagnostické možnosti brušného týfusu (graf) týždeň