1 / 7

AFLP

AFLP. Polimorfizm długości amplifikowanych fragmentów. Justyna Wieczorek Piotr Szumiło Filip Poszumski. Charakterystyka AFLP. Polimorfizm d ł ugo ś ci amplifikowanych fragmentów (AFLP) jest metod ą umo ż liwiaj ą c ą fingerprinting DNA, która łą czy zalety PCR i RFLP .

cachez
Download Presentation

AFLP

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. AFLP Polimorfizm długości amplifikowanych fragmentów Justyna Wieczorek Piotr Szumiło Filip Poszumski

  2. Charakterystyka AFLP • Polimorfizm długości amplifikowanych fragmentów (AFLP) jest metodą umożliwiającą fingerprinting DNA, która łączy zalety PCR i RFLP. • Wymaga bardzo małej ilości wyjściowego DNA i polega na badaniu obecności lub braku amplifikacji specyficznych fragmentów restrykcyjnych, podczas gdy w metodzie RFLP porównujemy długość specyficznych fragmentów restrykcyjnych. • Łączy trawienie enzymami restrykcyjnymi z reakcją PCR.

  3. Przebieg metody • Pierwszy etap AFLP polega na trawieniu oczyszczonego DNA dwoma enzymami restrykcyjnymi • Nastepnie do otrzymanych fragmentów przyłączane są adaptory o długości 20-30 nukleotydów • Po ligacji adaptorów prowadzona jest reakcja preamplifikacji. Przyłączają się startery preselekcyjne, komplementarne do adaptora, miejsca restrykcyjnego, oraz posiadające na końcu 3’ jeden nuleotyd selektywny • Po amplifikacji niespecyficznej przeprowadza się amplifikację specyficzną – startery posiadają 2-4 specyficzne nukleotydy • Rozdział produktu następuje na żelu poliakrylamidowym. Detekcja prążków odbywa się przez barwienie srebrem bądź autoradiograficznie, jeśli wcześniej użyto znakowane radioaktywnie adaptory

  4. Schemat metody

  5. Odczytywanie wyników

  6. Do zalet należy zaliczyć możliwość analizy wielu segregujących loci na jednym autoradiogramie. Ze względu na dużą rozdzielczość i wiarygodność, AFLP jest wykorzystywany do identyfikacji odmian hodowlanych. Zaletą jest również krótki czas analiz Duże doświadczenie i umiejętność analizy wyników można zaliczyć do wad metody. Zalety i wady metody

  7. Bibliografia • Biotechnologia roślin pod red. Stefana Malepszego, PWN 2001 • Przykładay analiz DNA pod red. Ryszarda Słomskiego, AR w Poznaniu 2004 • www.racjonalista.pl

More Related