1 / 43

Spektrometria mas

Spektrometria mas. ZNACZĄCE POSTACIE SPEKTROMETRII MAS. Ion Chemistry Francis William Aston (1877 - 1945) Cambridge University, Great Britain; Nobel Prize in Chemistry 1922. 1 st MS Joseph John Thomson (1856 - 1940) Cambridge University, Great Britain; Nobel Prize in Physics 1906.

chiko
Download Presentation

Spektrometria mas

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Spektrometria mas

  2. ZNACZĄCE POSTACIE SPEKTROMETRII MAS Ion Chemistry Francis William Aston (1877 - 1945) Cambridge University, Great Britain;Nobel Prize in Chemistry 1922 1st MS Joseph John Thomson (1856 - 1940) Cambridge University, Great Britain; Nobel Prize in Physics 1906 Fragmentation Mechanisms Fred W. McLafferty (1923) Cornell UniversityIthaca, New York Ion Trap Technique Wolfgang Paul (1913 - 1993) University of Bonn, Germany;Nobel Prize in Physics 1989 ESI of Biomolecules John B. Fenn (1917) Virginia Commonwealth University, Richmond, Virginia Mechanisms and Applications R. Graham Cooks (1941) Department of Chemistry, Purdue UniversityWest Lafayette, Indiana Peptide Sequencing usingMS Klaus Biemann (1926) MIT, Cambridge, Massachusetts MALDI Franz Hillenkamp (1936) University of Münster, Germany Mechanism of MALDI & ESI Michael Karas (1952) University of Frankfurt, Germany

  3. Joseph Thompson: IZOTOPY HELU 1911

  4. ZASADA POWSTAWANIA WIDMA MAS • Droga jonów w polu elektrycznym i magnetycznym: rezultat • działających sił: • Siła pola magnetycznego (Fm) • Siła odśrodkowa (Fc) • Energia kinetyczna w polu elektrycznym (E) Fm = Bev B = natężenie pola magnetycznego Fc = mv2/r v = prędkość cząstki Ek = eU = ½ mv2e = ładunek jonu m = masa cząstki r = promień toru U = natężenie pola elektrycznego Ek = energia kinetyczna cząstki

  5. ZASADA POWSTAWANIA WIDMA MAS Fm = Fc Bev = mv2/r v = Ber/m

  6. WIDMO MASOWE Stosunek masy jonu do jego ładunku w funkcji intensywności sygnału Intensywność m/z 1 Th = 1 Dalton/liczbę ładunków

  7. MASY ATOMOWE - IZOTOPY Symbol Masa atomowa Zawartość izotopu, % Węgiel12C 12.0000* 98.89 13C 13.0033 1.11 Chlor 35Cl 34.9689 75.77 37Cl 36.9659 24.23 * Masa uznana jako dokładnie 12 przez UPAC M(C) = 0.9889(12.0000) + 0.0111(13.0033) = 12.011 M(Cl) = 0.7577(34.9689) + 0.2423(36.9659) = 35.453

  8. SKŁAD IZOTOPOWY NIEKTÓRYCH PIERWIASTKÓW 1H 1.008 1.00783 99.99 2H 2.01410 0.016 12C 12.011 12.0000 (std) 98.89 13C 13.00336 1.11 14N 14.0067 14.0031 99.64 15N 15.0001 0.36 16O 15.9994 15.9949 99.76 17O 16.9991 0.04 18O 17.9992 0.20

  9. SKŁAD IZOTOPOWY NIEKTÓRYCH PIERWIASTKÓW 19F 18.998 18.9984 100.0 28Si 28.0855 27.9769 92.17 29Si 28.9765 4.71 30Si 29.9738 3.12 32S 32.066 31.9721 95.04 33S 32.9715 0.76 34S 33.9679 4.20 35Cl 35.4527 34.9689 75.77 37Cl 36.9659 24.23

  10. SKŁAD IZOTOPOWY NIEKTÓRYCH PIERWIASTKÓW 31P 30.9738 30.9738 100.0 79Br 79.9094 78.9183 50.52 81Br 80.9163 49.48 126I 126.9045 126.9045 100.00 M(Br): [% 79Br x 78.9183] + [% 81Br x 80.9163] [50.52 x 78.9183] + [49.48 x 80.9163] = 79.9094

  11. SKŁAD IZOTOPOWY NIEKTÓRYCH PIERWIASTKÓW

  12. SKŁAD IZOTOPOWY – OBWIEDNIA IZOTOPOWA C1 C10 C100 m/z R.I. X 100 X+1 110 X+2 60 X+3 22 m/z R.I. X 100 X+1 1.1 m/z R.I. X 100 X+1 11.0 m/z

  13. MASA CZĄSTECZKOWA MASA MONOIZOTOPOWA Masa cząsteczkowa respiryny C33H40N2O9 Masy atomowe: Masy izotopów: C: 33 x 12.011 = 396.363 C: 33 x 12.0000 = 396.000 H: 40 x 1.0079 = 40.316 H: 40 x 1.0078 = 40.312 N: 2 x 14.0067 = 28.013 N: 2 x 14.0031 = 28.006 O: 9 x 15.9994 = 143.995 O: 9 x 15.9949 = 143.954 608.687608.272

  14. PORÓWNANIE PROFILU IZOTOPOWEGO WIDMA ZMIERZONEGO I OBLICZONEGO

  15. WIDMO MAS A STRUKTURA MOLEKUŁY

  16. RODZAJE JONIZACJI Miękka Jonizacja cząsteczek wiązką elektronów Twarda

  17. METODY JONIZACJI

  18. WIDMO EI KWASU OCTOWEGO

  19. ZALEŻNOŚĆ STOPNIA FRAGMENTACJI OD SIŁY POLA ELEKTRYCZNEGO

  20. ESI Orifice Plate LC 5kV Desolvation & Fission Nebulizing Gas Droplet Formation To MS Gas Phase Ion Generation Drying Gas Curtain Plate Curtain Gas

  21. REDUKCJA KROPLI I POWSTAWANIE JONÓW

  22. ESI Tryb jonów ujemnych Tryb jonów dodatnich [M+H]+ [M-H]- [M+nH]n+i [M+Na+]+ • [M-nH]n-i [M+I-]-

  23. ESI • PotrójnyKwadrupol (QqQ) • 2 kwadrupole filtrujące masy i jedna cela zderzeń. • Pułapka jonowa (IT) • Pojedyncza pułapka działa jako analizator mas i cela zderzeń. • Hybrydy (np. LIT) • Instrument wygląda jaki QqQ ale jeden kwadrupol pełni rolę pułapki jonów.

  24. POTRÓJNY KWADRUPOL Akumulacja jonów Q0 Q1 Q2 Q3 Filtrowanie jonów Filtrowanie jonów Cela zderzeń

  25. Q0 Q1 Q2 Q3 POTRÓJNY KWADRUPOL • Q1 selkcjonuje [M+H]+ • Q2 fragmentuje wyselkcjonowany jon. • Q3 filtruje i monitoruje tylko wybrany jon. Ion accumulation Precursor ion selection Fragmentation N2 CAD Gas

  26. WIDMO ESI ZWIĄZKU O NISKIEJ MASIE

  27. WIDMO ESI SYNTETYCZNEGO OLIGONUKLEOTYDU

  28. WIDMO ESI KOMPLEKSÓW 18-C-6 Z KATIONAMI LITOWCÓW

  29. WIDMO ESI PEPTYDU O MASIE 16952,20 Da

  30. ROZDZIELCZOŚĆ SPEKTROMETRU MAS

  31. FRAGMENTACJA ŁAŃCUCHA PEPTYDOWEGO

  32. FRAGMENTACJA ŁAŃCUCHA PEPTYDOWEGO b2-H2O b3- NH3 a2 b2 a3 b3 HO NH3+ | | R1 O R2 O R3 O R4 | || | || | || | H -- N --- C --- C --- N --- C --- C --- N --- C --- C --- N --- C -- COOH | | | | | | | H H H H H H H y3 y2 y1 y2 - NH3 y3 -H2O

  33. FRAGMENTACJA ŁAŃCUCHA PEPTYDOWEGO

  34. G V D L K • Identyfikacja • peptydu Intensity MS/MS mass 0 mass 0 IDENTYFIKACJA PEPTYDÓW/BIAŁEK PRZY UŻYCIU MS/MS

  35. TANDEM MS

  36. „ODCISK PALCA” W MS Peptide Mass Fingerprinting (PMF)

  37. PROTEOMIKA - MS Trypsin + Gel punch p53 Trx G6PDH

  38. ENZYMATYCZNA HYDROLIZA BIAŁEK DO PEPTYDÓW HPLC GTDIMR do MS/MS PAKID MPSERGTDIMRPAKID...... MPSER …… …… PEPTYDY (tryptic peptides) BIAŁKO

  39. SekwencjaMasa (M+H)Peptydy trypt. >Białko 1 acedfhsakdfqea sdfpkivtmeeewe ndadnfekqwfe >Białko 2 acekdfhsadfqea sdfpkivtmeeewe nkdadnfeqwfe >Białko 3 MASMGTLAFD EYGRPFLIIK DQDRKSRLMG LEALKSHIM A AKAVANTMRT SLGPNGLD KMMVDKDGDVTV TNDGAT ILSM MDVDHQIAKL MVELS KSQDD EIGDGTTGVV VLAG ALLEEAEQLLDRGIHP IRIAD acedfhsak dfgeasdfpk ivtmeeewendadnfek gwfe acek dfhsadfgeasdfpk ivtmeeewenk dadnfeqwfe SQDDEIGDGTTGVVVLAGALLEEAEQLLDR2 DGDVTVTNDGATILSMMDVD HQIAK MASMGTLAFDEYGRPFLIIK2 TSLGPNGLDK LMGLEALK LMVELSK AVANTMR SHIMAAK GIHPIR MMVDK DQDR 4842.05 4842.05 14563.36 BIBLIOTEKA PEPTYDÓW TRYPTYCZNYCH

  40. collision cell MS-2 MS-1 Ion Source TANDEM MS MS LC MS/MS

  41. ANALIZA DANYCH S e kwencja MS/MS instrument Analiza przy użyciu baz danych

  42. PMF online • Mascot • www.matrixscience.com • ProFound • http://129.85.19.192/profound_bin/WebProFound.exe • MOWSE • http://srs.hgmp.mrc.ac.uk/cgi-bin/mowse • PeptideSearch • http://www.narrador.embl-heidelberg.de/GroupPages/Homepage.html • PeptIdent • http://us.expasy.org/tools/peptident.html

More Related