Applicazioni genetica umana e molecolare II parte Dr. Stefania Gonfloni

1. Applicazioni genetica umana e molecolare II parte Dr. Stefania Gonfloni Stefania.Gonfloni@uniroma2.it Studio 4319 BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI Principi e tecniche Terry A. Brown BIOTECNOLOGIA MOLECOLARE Principi e applicazioni del DNA ricombinante Bernard R. Glick Jack J.Pasternak GENETICA UMANA E MOLECOLARE Stracan T. Read A.P.

2. Che cos’è la clonazione dei geni? Frammento di DNA con il gene da clonare viene inserito in un Vettore Il vettore trasporta il gene all’interno della cellula ospite Il vettore si moltiplica all’interno della cellula ospite producendo numerose copie uguali non solo a se stesso ma anche del gene che trasporta Quando la cellula ospite si divie, alla progenie vengono passate copie della molecola di DNA ricombinante ed il vettore si moltiplica ulteriormente Dopo un grande numero di divisioni cellulari, si produce una colonia, o clone costituita da cellule identiche.

12. La PCR

16. Espressione genica con promotori forti e regolabili

21. Vettori per l’espressione dei geni ptac: ibrido funzionale dai promotori trp (-35) e lac (-10)

22. Integrazione del gene clonato nel sito cromosomico

23. b. subtilis

24. Vettore di espressione eucariotico p:unità di trascrizione eucariotica

26. Metodo per ottenere sequenze di cDNA a lunghezza completa

27. Saggio di protezione dalla nucleasi S1

28. SAGE

29. Screening multiplo dell’espressione genica

30. Immunoblotting (Western blotting)

31. Immunocitochimica Espressione della -tubulina in un cervello di un embrione di topo di 12, 5 giorni Immunofluorescenza Proteina a fluorescenza verde come etichetta fornisce un modo utile per seguire l’espressione delle proteine

32. Identificazione di sequenze di regolazione mediante l’uso di geni Indicatori e le interazioni tra DNA e proteine

33. Analisi delle delezioni nella regionie promotore del gene umano per Il fattore VIII

34. Footprinting mediante DnasiI

35. Saggio di ritardo nel gel

36. I sistemi “a doppio ibrido” e a “singolo ibrido” in lievito

37. Phage display

38. Preparazione di topi transgenici mediante microiniezione nei pronuclei

40. La mutagenesi mirata mediante ricombinazione omologa puo’ inattivare un predeterminato gene cromosomico all’interno di una cellula integra “Hit and run”

41. La mutagenesi mirata con doppia sostituzione può essere usata per introdurre nel DNA piccole mutazioni “Tag and exchange”

42. Il metodo knock-in consente di sostituire l’attività di un gene di un dato cromosoma con quella di un altro gene appositamente introdotto

43. Struttura della sequenza di riconoscimento di loxP

44. Gene trapping

45. Clonazione animale