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EVIDENCIA EX VIVO E IN VIVO DEL EFECTO PROLIFERADOR DE LA 1,25(OH)2D3 SOBRE LAS CMLV. PAPEL MEDIADOR DEL VEGF. Métodos. Concentraciones diferentes. calcitriol. CMLV de aorta de rata Sprague-Dawley. +. Factor trófico: FGF. CMLV Cultivo primario.

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Presentation Transcript

  1. EVIDENCIA EX VIVO E IN VIVO DEL EFECTO PROLIFERADOR DE LA 1,25(OH)2D3 SOBRE LAS CMLV. PAPEL MEDIADOR DEL VEGF

  2. Métodos Concentraciones diferentes calcitriol CMLV de aorta de rata Sprague-Dawley + Factor trófico: FGF CMLV Cultivo primario

  3. Efecto del calcitriol en la expresión de VDR 0 h 12 h 16 h 24 h - - - - + + + 1,25(OH)2D3 (100nM) 51 kD * * VDR expression (%)

  4. Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV in vitro  *  #  #  % over control % over control 1,25(OH)2D3 (nM) 1,25(OH)2D3 (nM) bFGF (ng/mL) 20 20 20 20 20 0 bFGF (ng/mL) 0 0 0 0 0

  5. TIME (HOURS) 0 16 22 6.9% IN S PHASE 6.7% IN S PHASE 24.9% IN S PHASE WITHOUT 1,25(OH)2D3 11.1% IN S PHASE 55.2% IN S PHASE 27.9% IN S PHASE WITH 100nM 1,25(OH)2D3 Efecto del calcitriol en la progresión del ciclo celular de las CMLV in vitro

  6. Efecto del calcitriol en la expresión de VEGF en las CMLV in vitro * * * VEGF expression % pmols/4000 cells

  7. % over control % over control Efecto del VGA1102 en la proliferación de CMLV inducida por calcitriol MTT Assay * + + - - 1,25(OH)2D3 (100nM) VGA1102 (1mM) - + + -

  8. Efecto de anticuerpos anti-VEGF en la proliferación de CMLV inducida por calcitriol * % over control - - + + 1,25(OH)2D3 (100nM) - - + + Anti VEGF (0.6 mg/mL)

  9. Posible VDRE en el gen del VEGF 7201 CTGGGCCCGTAAGCATTTACTAACTACTCTCCCTGCTAAAAGAGAGCCATCCGGGAGGTG 7260 7261ACTCAGGGCAGCTATGATAGGCCAGATGGGATGGGGTGGCTTTTTTCCTCATAAGATCCT 7320 7321 CATAACATTGCTCCATTGAAATTGGGGTTCCCAACAGGTACCAGCATCCCACGGAGCCTC 7380 7381 AGTACTGTGTGCAGAGGGATGGAGATGGTGGAGTAACCTTTTCGGGGGACCAGTAGGAAG 7440 7441 ACTGTTGGCTCCCTTTCTCAGAAGCTCAGCAGACCTGGGTGAGGGCTGGGACTGGTTGGT 7500 7501 CCCTCTCTTCCCACAGGTATCAGAGCCCCCTCTTGTTCCCAGGGGAGCCTAGGAGCAGCT 7560 7561 GGGCCAAAGCCCAACCAGGAATTTTTCCAGGCTGGTTCCTATATCCAAGGGTGGGCTGGA 7620 7621 GGTGGGGGCTTTGGGGAGCTCTTAAGGAAGACACGAGGAGGTGAAGGGGACTTTGTGGAA 7680 ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 9721 CCTGGAGAAGCCGGGGCCCGAGAAGAGAGGGGAGAAAGAGAAGGAAGAGGAGAGGGGGCC 9780 9781 GCAGTGGGCGCTCGGCTCTCGGGAGCCGGGCTCATGGACGGGTGAGGCGGCGGTGTGCGC 9840 9841 AGACAGTGCTCCAGCCGCGCGCGCGCCCCAGGCCCCGGCCCGGGCCTCGGTTCCAGAAGG 9900 9901 GAGAGGAGCCCGCCAAGGCGCGCAAGAGAGCGGGCTGCCTCGCAGTCCGAGCCGGAGAGG 9960 9961 GAGCGCGAGCCGCGCCGGCCCCGGACGGGCCTCTGAAACCATGAACTTTCTGCTCTCTTG 10020 10021 GGTGCACTGGACCCTGGCTTTACTGCTGTACCTCCACCATGCCAAGGTAAGCGGTCGTGC 10080

  10. Métodos Anillos de aorta de rata Sprague-Dawley calcitriol CMLV Ex vivo

  11. Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV ex vivo A1 B1 * % of positive nucleus A2 B2

  12. Métodos Rata Sprague-Dawley Con 5/6 de reducción de masa renal CMLV in vivo 8 semanas calcitriol

  13. * vit D 1 mg/kg Control Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV in vivo A1 B1 B % of positive nucleus A2 B2

  14. Efecto del calcitriol en la arquitectura de la aorta Media/lumen ratio Area of the media * mm2 No treatment Calcitriol 1 mg/kg No treatment Calcitriol 1 mg/kg

  15. Conclusión El calcitriol induce un aumento en la proliferación de las CMLV in vitro e in vivo. Este efecto está mediado por un aumento en la expresión de VEGF. El aumento de proliferación de las CMLV in vivo produce un cambio en la arquitectura vascular.

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