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Dott. Chiara Prunotto

UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI TORINO SCUOLA DI SPECIALIZZAZIONE IN BIOCHIMICA CLINICA. UN MODELLO MURINO DI TUMORIGENESI UTILE PER SVILUPPARE NUOVI APPROCCI ALLA TERAPIA DEL RABDOMIOSARCOMA. Dott. Chiara Prunotto. Università di Torino - CeRMS. HGF e recettore Met. shRNA.

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  1. UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI TORINO SCUOLA DI SPECIALIZZAZIONE IN BIOCHIMICA CLINICA UN MODELLO MURINO DI TUMORIGENESI UTILE PER SVILUPPARE NUOVI APPROCCI ALLA TERAPIA DEL RABDOMIOSARCOMA Dott. Chiara Prunotto Università di Torino - CeRMS

  2. HGF e recettore Met shRNA

  3. Fenotipo muscolare di topi MetD/D +/+ Met D/D

  4. Il ruolo fisiologico di HGF/met nel muscolo adulto HGF Holguin HC. and Olwin BB., Developmental Biology, 2004

  5. RABDOMIOSARCOMA È il più comune sarcoma dei tessuti molli Rappresenta 11% dei sarcomi pediatrici Ipotizzata un’origine mesenchimale/muscolare Ad oggi non sono chiari i meccanismi molecolari coinvolti nella sua eziologia e mantenimento.

  6. RABDOMIOSARCOMI

  7. RABDOMIOSARCOMIcitogenetica

  8. MET potrebbe essere un target nella terapia dei rabdomiosarcomi? HGF/Met sono espressi in cellule di rabdomiosarcoma umano alveolare e embrionale Silenziando l’espressione di Met in cellule ERMS o ARMS: blocca la proliferazione, la sopravvivenza e l’invasività, si attiva apoptosi Iniettando in topi nudi cellule di ERMS o ARMS, in seguito al silenziamento di Met, si ha blocco della crescita neoplastica e la riduzione della massa tumorale

  9. Tetracycline-controlled transactivator (tTA) MCK promoter +Dox -Dox tTA Transcription Transcription EGFP HGF Bidirectional pBI “responder” vector Modello murino di espressione inducibile (tet-off) di HGF nel muscolo

  10. Vis Fluo Espressione di eGFP in topi MCKtTA-HGF

  11. Espressione di mRNA di HGF in muscoli di topi MCKtTA-HGF

  12. … in vivo GFP … in vivo Muscle - DOX + DOX HGF Espressione del transgene può essere modulata in vivo

  13. Aumento della proliferazione di cellule satelliti in topi MCKtTA-HGF Pax7 MCK HGF MCK 38% Pax7 Ki67 Ki67 41%

  14. Una subpopolazione di cellule satelliti potrebbe agire come “cancer stem cell” nello sviluppo dei rabdomiosarcomi? HGF-INK4a -/- MCK-INK4a -/- MCK/HGF/INK4a -/- (MHI)

  15. Topi MHI sviluppano rabdomiosarcomi con alta frequenza e basso tempo di latenza

  16. Tutti i topi MHI sviluppano rabdomiosarcomi Alcuni topi MHI sviluppano anche iperplasia muscolare MCK MHI MCK MHI

  17. Progressione da muscolo normale a neomiogenesi a tumore Tessuto muscolare Nuove fibre Neoplasia Ki67 Pax7 Met

  18. Molti tumori hanno caratteristiche simili alle caratteristiche dei ERMS umani Fluo Vis hERMS topi MHI

  19. Cellule MHI-RMS esprimono marker miogenici come linee cellulari dei RMS umani

  20. Le cellule MHI-RMS crescono in soft agar

  21. Le cellule di RMS di topi MHI hanno un comportamento analogo a cellule satelliti

  22. + DOX - DOX - DOX - DOX HGF HGF HGF - HGF - HGF HGF Resident satellite cell MCK-expressing myotube Alcune cellule satelliti attivate da HGF si differenziano, altre accumulano ulteriori lesioni genetiche e diventano tumorigeniche HGF release New fibers RMS HGF HGF Newly formed fibers Aberrant tumorigenic myoblasts Activated satellite cell

  23. CONCLUSIONI • La cellula satellite è la più probabile cellula d’origine del rabdomiosarcoma. • Si conferma il sinergismo tra l’attivazione dell’asse HGF/Met e la perdita dei soppressori p19ARF e p16 INK4a. Lavoro futuro • Il segnale innescato da Met è indispensabile al mantenimento del tumore ?

  24. Un sentito ringraziamento Prof. Carola Ponzetto Dott. Riccardo Taulli Università di Torino-CeRMS

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