Borrélie – úskalí laboratorní diagnostiky

1. RNDr. Alena Lehovcová Borrélie – úskalí laboratorní diagnostiky

2. U LB je diagnostika založena na klinických symptomech, objektivních nálezech, případně na údajích o přisátí klíštěte. • Při stanovení diagnózy se nesmí zapomínat na jiná onemocnění. • Testování se nedoporučuje,pokud chybí symptomy LB nebo při jasných klinických příznacích – EM !

3. Laboratorní metody -přímý průkaz patogena- metody založené na detekci protilátek (odpověď na infekci)

4. Přímá detekce patogena: • Mikroskopie v temném poli • ELMI • kultivace • PCR Poznámky: -tyto metody musí být hodnoceny v kontextu s klinickým obrazem. -lze –li po terapii dále prokázat bakterii B.b., je to důkaz selhání terapie.

5. PCR - DNA detekce Díky možné kontaminaci přináší více falešně pozitivních výsledků než kultivace Pozn.: negativní výsledek nevylučuje LB Pozor na speciální nároky na odběr materiálu!

6. Metody založené na detekci protilátek • NIF • ELISA • Western blot CDC doporučuje dvoustupňový postup: • Screeningové testy IFA nebo ELISA • konfirmace Western blot - specifický

7. Screeningové testy IFA nebo ELISA a) IgG a IgM negativní, vysoce nepravděpodobné, že jde o LB.Výjimka: test proveden ve velmi časné fázi nemoci, pak opakovat vyšetření v párovém vzorku. b) IgG nebo IgM je pozitivní nebo hraniční, následuje další krok (tyto testy příliš senzitivní, ale nespecifické, pozitivní i u lidí bez LB)

8. Western blot – specifický • separace specifických a nespecifických proteinů • přítomny všechny relevantní antigeny • charakterizace antigenu referenčními monoklonálními protilátkami NEDOPORUČUJE SE provádět bez prvního kroku (zvyšuje se pravděpodobnost falešně pozitivních výsledků)

9. Interpretace výsledků Western blot a) IgM negat a IgG negat - buď: časná fáze (pozitivita WB později než v ELISA) - nebo: první krok byl metodou ELISA pravděpodobně falešně pozitivní Vyšetření opakovat za 3 - 4 týdny.

10. b)IgM pozit and IgG negat - opakovat test za několik týdnů IgM+ stále přetrvává, příznaky pravděpodobně nejsou způsobeny LB ! c) IgG silně pozitivní - v testu vidíme široké spektrum proužků - jde o přítomnost protilátek, ne nutně o onemocnění ( např. lesní dělníci )

11. d) IgG hraniční - klinické příznaky trvají, opakovat za dva týdny

12. Důvody falešné pozitivity • Důsledek polyklonální aktivace B lymfocytů v kontextu : - s infekcí EBV - jiných herpetických virů - autoimunitních onemocnění • Často zůstává důvod falešně pozitivních IgM neobjasněn

13. VLIV ATB TERAPIE • IgG protilátky přetrvávají velice dlouho i po úspěšné léčbě. • Kritérium úspěšné léčby klinický stav nebo stabilizace sérologického nálezu • Pokles hladiny protilátek nevylučuje perzistenci patogenního organizmu. • Sérologické nálezy nejsou vhodné jako kritérium úspěšnosti léčby. • Časná ATB léčba může zabránit vývoj měřitelných hladin protilátek u primoinfekcí

14. ZDROJE CHYB PŘI SÉRODIAGNOSTICE • falešně negativní výsledky- rozdíl v Ag použitém v testu od Ag, který způsobil infekci- diagnostická okna • falešně pozitivní výsledky- zkřížené reakce s bakteriálními antigeny - autoimunita

15. DALŠÍ TESTY V poslední době nedoporučovány CDC • testování antigenu v moči • imunofluorescenční barvení buněčných stěn • testování klíšťat

16. ZÁVĚREM • Odběr krve provést za měsíc po přisátí klíštěte • Při stanovení diagnózy musí být určujícím kritériem klinický obraz, všechny dg metody jsou podpůrné • V případě podezření na LB nutno žádat dvoustupňový postup testování

17. Otázky ? Odpovědi !