Toutain J , Dupont-Moufakkir S, Hargous C, Roumy M, Vanicatte C, Vernet M, Vironneau HP, Soler G, Taine L, Horovitz J, S

1. Les techniques de cytogénétique moléculaire réalisées à partir de villosités choriales devraient être effectuées au niveau de l’axe mésenchymateux (et l’examen ‘direct’ ne devrait plus être utilisé) Toutain J, Dupont-Moufakkir S, Hargous C, Roumy M, Vanicatte C, Vernet M, Vironneau HP, Soler G, Taine L, Horovitz J, Saura R. Centre de Médecine Fœtale, CHU de Bordeaux, Bordeaux

2. Introduction • DPN à la recherche d’anomalies chromosomiques • Invasif • Amniocentèse (15-16 SA) • Choriocentèse (12-13 SA) • (Sang fœtal) • (Non invasif) • Caryotype conventionnel après culture (7 jours à 3 semaines…) • Nécessité de techniques rapides

3. Biopsie de trophoblaste • A partir de 12-13 SA • Voie trans-abdominale, extra-amniotique • IMG par aspiration avant 14 SA • DPN de choix pour gérer: • Anomalies échographiques du 1er trimestre • FSM pathologiques au 1er trimestre Cytotrophoblaste Axe mésenchymateux

4. Biopsie de trophoblaste • Caryotype après culture • Obtenu rapidement (7-8 jours en moyenne) • TRES FIABLE • Examen ‘direct’ • Obtenu en moins de 24 heures • NON FIABLE • Mais techniques rapides nécessaires pour résultat en 24-48 heures Examen ‘direct’ Culture

5. Diagnostic cytogénétique rapide • Essentiellement les principales aneuploïdies • Impose résultat cytogénétique fiable • Techniques conventionnelles • Examen ‘direct’ des villosités choriales • Techniques moléculaires • iFISH • QF-PCR • MLPA • aCGH… Appliquées à quelle fraction des villosités ?

8. Biopsie de trophoblaste • Tissus extra-embryonnaires • Existence de discordances fœto-placentaires • Faux négatifs: • de l’examen ‘direct’ (fréquent) • de la culture (rarissime) •  « Faux positifs »: anomalies chromosomiques limitées au placenta (présentes au niveau de la culture et/ou de l’examen ‘direct’) POURQUOI PRIVILÉGIER L’AXE MÉSENCHYMATEUX ? Plus représentatif du patrimoine chromosomique fœtal

11. Pourquoi privilégier l’axe mésenchymateux ?

12. Pourquoi privilégier l’axe mésenchymateux ?

13. La fiabilité d’un examen donné ne dépend pas seulement de la technique utilisée mais aussi du tissu étudié… • Pour un diagnostic fiable à partir de villosités choriales, différentes études montrent qu’il est souhaitable de privilégier l’axe mésenchymateux au cytotrophoblaste ou aux villosités entières

14. Comment s’assurer de travailler au niveau de l’axe mésenchymateux ?

21. Patientes 386 ♀ Indications : clarté nucale ↑ PVC Entre 12-14 SA Contrôle extemporané (quantité) Etude CHU de Bordeaux

22. Cytogénétique moléculaire iFISH après Trypsine-EDTA et collagénase Kit commercial principales aneuploïdies (13, 18, 21 et gonosomes) Cytogénétique conventionnelle Culture ‘Direct’: RETROSPECTIF (anomalie culture et/ou iFISH) Méthodes

23. Résultats

24. Anomalies chromosomiques iFISH et « culture » • 88 (22,8%) anomalies cytogénétiques • Absence de discordance entre iFISH et culture • 3 (3,41%) anomalies non détectables par iFISH

25. Faux négatifs de l’examen ‘direct’ • 0,77% des DPN • 3,41% de faux négatifs observés avec examen ‘direct’

26. Jusqu’en 1995 au CHU de Bordeaux: examen ‘direct’ systématique: Peu de matériel nécessaire (5-10 mg); obtention rapide caryotype MAIS: Faux positifs (ACLP type I) Faux négatifs Risque a priori +++ ≈ 3% faux négatifs indication signes d’appel écho.

27. iFISH: Après digestion enzymatique Axe mésenchymateux Absence de discordances entre iFISH et culture IMG précoce par aspiration Principales aneuploidies 3,41% anomalies non détectables IMG tardives

28. Autres techniques moléculaires : discordances publiées Proposition de certains auteurs: digestion enzymatique DPN 1er trimestre signes appel écho: Technique moléculaire « rapide » appliquée à axe mésenchymateux