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Università degli studi di Napoli “Federico II ”

Università degli studi di Napoli “Federico II ”. Istituto Tecnico Industriale Statale Francesco Giordani Napoli. SINTESI E CARATTERIZZAZIONE DI MIMOCHROME IV. Agostino Grimaldi. Metalloproteine:. Capaci di catalizzare importanti trasformazioni chimiche.

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Presentation Transcript

  1. Università degli studi di Napoli “Federico II” Istituto Tecnico Industriale StataleFrancesco GiordaniNapoli SINTESI E CARATTERIZZAZIONE DI MIMOCHROME IV Agostino Grimaldi

  2. Metalloproteine: Capaci di catalizzare importanti trasformazioni chimiche. Attivano legami chimici, altrimenti inerti. Gruppi prostetici simili, contenenti spesso lo stesso metallo, possono svolgere funzioni differenti

  3. Low M.W. Minimal model Protein Modelli Mimanti Metalloproteine Design di piccole proteine e peptidi, capaci di formare complessi con gruppi prostetici e ioni metallici

  4. Mimochromes: Modelli Mimanti Emo-Proteine Mimochrome

  5. MIMOCHROMES IV • Molecole composte da due catene peptidiche elicoidali, covalentemente legate alla deuteroporfirina IX R1 O O R N N M N N R, R1 M= Fe Ac-Glu-Ser-Gln-Leu-His-Ser-Asn-Lys-Arg-NH2 R =R1

  6. Fasi sperimentali • Legame delle catene peptidiche alla deuteroporfirina • Purificazione mediante HPLC • Inserzione del Fe • Caratterizzazione UV/Vis

  7. NH NH HO OH NH2 O O O O O R N N N N N N N N Sintesi Mimochrome IV Formazione del legame ammidico tra l’e-amminico della Lys-8 e i gruppi carbossilici della deuteroporfirina IX 2 Attivanti DMF

  8. 200 200 21,259 400 400 21,195 100 100 mAU mAU mAU mAU 200 200 0 0 -100 -100 0 0 10 20 30 40 10 20 30 40 Minutes Minutes La reazione è stata seguita attraverso RP-HPLC analitico Purificazione del prodotto è stata ottenuta attraverso RP-HPLC Preparativo con fase stazionaria C-18 Mimochrome IV: grezzo di reazione Mimochrome IV puro

  9. O O O O NH NH N N N N Fe N N N N Inserzione del Fe NH2 Arg Lys Arg Ser His Leu Gln Ser Glu Ac NH2 Arg Lys Arg Ser His Leu Gln Ser Glu Ac NH2 Arg Lys Arg Ser His Leu Gln Ser Glu Ac NH2 Arg Lys Arg Ser His Leu Gln Ser Glu Ac NH NH Fe(CH3COO-)2 CH3COOH/TFE H H Il ferro si coordina ai quattro azoti del centro eme

  10. 400 400 21,195 mAU mAU 200 200 0 0 10 20 30 40 Minutes La reazione è stata seguita attraverso RP-HPLC analitico 19,072 150 150 100 100 mAU mAU 50 50 2,027 0 0 10 20 30 40 Minutes Mimochrome IV base Libera Mimochrome IV +Fe Il tempo di ritenzione di Mimochrome IV+Fe è inferiorequello di Mimochrome IV base libera

  11. Spettroscopia UV-Visibile 401.00 . 0.532 Mimochrome IV +Fe Mimochrome IV base Libera Gli spettri di mimochrome IV sono caratterizzati da una banda intensa intorno a 400nm e da altre bande nella regione del visibile

  12. L’inserzione del Fe varia la simmetria del centro porfirinico, provocando la diminuzione, da quattro a due, del numero di bande nella regione del visibile Mimochrome IV base Libera Mimochrome IV +Fe

  13. Calcolo del coefficiente di estinzione molare A = eCl Il coefficiente angolare della retta corrisponde al valore dell’e, l = 1

  14. Conclusioni • Proprietà principali delle eme-proteine • Apprendimento e applicazione delle tecniche cromatografiche RP-HPLC • Approfondimento di alcune metodiche sintetiche • Applicazione della spettroscopia UV-visibile

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