La especie posee 2n=12+XY n=6 + XY en machos Cromosomas holocinéticos

1. - En las dos especies, en profase temprana, los cromosomas sexuales se hallan mas condensados que los autosomas (heteropicnóticos positivos). - En Metafase I, en “Lycosa” los bivalentes se ubican en la placa ecuatorial sin un patrón especifico con los univalentes sexuales mas cercanos a un polo mientras que en Edessa los bivalentes se ubican formando un anillo con los univalentes sexuales en el centro del mismo. - En anafase I, tanto para “Lycosa” como para Edessa los cromosomas migran de forma telocéntrica. Los bivalentes autosomicos y los cromosomas sexuales en Lycosa segregan de forma reduccional. En cambio en Edessa los bivalentes autosomicos segregan de manera reduccional, mientras que los cromosomas sexuales lo hacen de manera ecuacional. - Todas las metafase II de Edessa presentan los cromosomas sexuales asociados en un pseudobivalente, mientras que en Lycosa se observan dos tipos de células, una con los dos cromosomas sexuales juntos y otra sin cromosomas sexuales. - A pesar de las diferencias antes mencionadas en ambas especies, el resultado final de la espermatogénesis es el mismo, la obtención de cuatro células haploides: en Edessa, dos espermatozoides con seis autosomas y un cromosoma X y dos espermatozoides con seis autosomas y un cromosoma Y; el sistema cromosómico de determinació del sexo XY macho/ XX hembra. En “Lycosa”, se obtienen dos espermatozooides con diez autosomas y dos cromosomas sexuales (X1X2) y dos espermatozoides con diez autosomas; el sistema cromosómico de determinación del sexo es X1X20 en machos / X1X1X2X2 en hembras. ANALISIS COMPARATIVO DE LA MEIOSIS EN DOS MODELOS, CROMOSOMAS MONOCENTRICOS Y HOLOCINETICOS. Natali Di Russo1 & Marina Pena2 1- Florida Day School. 2-IES en Lenguas Vivas “Juan Ramón Fernández” • TRABAJO DE LABORATORIO • Se realizaron disecciones de chinches para extraer los testículos. • Se fijaron los testículos en 3:1 (tres partes de alcohol metílico y una de ácido acético). • Técnica estándar • Se realizaron preparados con el material obtenido y con material previamente fijado de arañas, utilizando hematoxilina como tinción. • Se prosiguió con el aplastado. • Se examinaron los preparados bajo microscopio óptico y se dibujaron células en los distintos estadios representativos. • Las mejores células se fotografiaron con un fotomicroscopio y películas de 50 asas. • Se revelaron los negativos y se pasaron las fotos a papel. • Técnica de bandeo con DAPI-CMA • Se realizaron preparados por técnica de aplastado en ácido acético 75% • Se colocaron las preparaciones en hielo seco y se saltaron los cubreobjetos. • Se realizó la técnica de coloración fluorescente siguiendo el protocolo que se utiliza de rutina en el laboratorio. INTRODUCCIÓN (GENERAL) La meiosis es un mecanismo de división celular único de los organismos eucariotas. El objetivo de este proceso es reducir el número de cromosomas de 2n a n, para conservar el número cromosómico de generación en generación. La mayoría de los organismos poseen cromosomas con centrómero localizado (monocéntricos), mientras que unos pocos grupos de invertebrados y plantas monocotiledóneas presentan cromosomas holocinéticos (sin constricción primaria o centrómero). El objetivo de este trabajo es comparar el comportamiento meiótico en dos especies distintas, cada una presentando un tipo diferente de cromosomas. INTRODUCCIÓN “Lycosa” pampeana Lycosa pampeana (Figura 1) es una especie de araña que posee un veneno necrótico-cutáneo En los humanos, el veneno de las “Lycosas” sudamericanas provoca la caída de la piel en extensiones de hasta 20 cm de diámetro, dejando al desnudo los músculos subyacentes. El veneno necesita de un contacto relativamente prolongado para producir la necrosis, por lo que es necesario que sea inyectado en una zona poco vascularizada y de piel gruesa. Por lo tanto, sólo es peligroso para los humanos y animales grandes, ya que en general los animales pequeños tienen piel delgada. Estas arañas son de carácter enérgico pero muy poco agresivas y frecuentemente pican sin inyectar veneno. Son menos irritables durante la primavera y el verano, pero durante el otoño y el invierno se muestran muy nerviosas, en especial si les falta el sol, picando con facilidad e incluso haciendo derroche de veneno. La peligrosidad de las “Lycosa” parece depender de la latitud. Como la gran mayoría de las arañas, posee cromosomas monocéntricos. Figura 2 INTRODUCCIÓN Edessa meditabunda Los insectos conocidos como “chinches” pertenecen al suborden Heteroptera, cuyas especies revisten gran inportancia ya que son perjudiciales tanto para la salud como para la agricultura. Las especies que pertenecen a la familia Pentatomidae son en su mayoria fitofagas, es decir, se alimentan de diversos cultivos por lo que se las considera plagas con una gran importancia agroeconómica para nuestro pais. Edessa meditabunda (Figura 2) es una especie de chinche en la que tanto las ninfas como los adultos segregan cimicina, una sustancia hedionda, especialmente al ser molestados. En Argentina, se encuentra desde el norte hasta el Valle de Río Negro, habitando en los órganos aéreos de diversos vegetales cultivados y silvestres, especialmente en solanáceas. Como todas las especies del género Heteroptera, posee cromosomas holocinéticos. Figura 1 RESULTADOS Figura 3.“Lycosa” pampeana. A-Prometafase mitótica. B- Paquitene. C-Diplotene. D-Diacinesis. E-Metafase I. F y G- Anafase II. Las flechas señalan los cromosomas sexuales. Barra= 10µm. • La especie presenta 2n=20 + X1X2 n=10 + X1X2 en machos • Cromosomas telocéntricos (monocéntricos) • En paquitene los cromosomas sexuales son heteropicnóticos positivos en comparación a los bivalentes autosómicos. • En diplotene se observa un bivalente mayor, uno menor y ocho intermedios cuyos largos varían. Los cromosomas sexuales están juntos, son de tamaño semejante al bivalente mayor y continúan siendo heteropicnóticos positivos. • En diacinesis, se puede observar un quiasma en cada bivalente. • En metafase I los cromosomas sexuales se tornan isopicnóticos y se los puede distinguir de los autosomas por ubicarse fuera de la placa ecuatorial. • En anafase I los bivalentes autosómicos y los cromosomas sexuales se dividen reduccionalmente; migrando los dos sexuales juntos a un polo. • En metafase II podemos observar que los cromosomas son telocéntricos ya que muestran una forma de V. • En anafase II los cromosomas se dividen ecuacionalmente. Figura 4 Edessa meditabunda. A y B Paquitene. C-Diplotene. D- Prometafase I. E-Metafase I. F-Anafase I. G- Metafase II. Las flechas señalan los cromosomas sexuales. Barra= 10µm RESULTADOS • La especie posee 2n=12+XY n=6 + XY en machos • Cromosomas holocinéticos • En paquitene los cromosomas sexuales son heteropicnoticos positivos ya que están mas condensados que los bivalentes autosomicos. • En diplotene se distingue un bivalente mayor, uno menor y cuatro de tamaño intermedio. En general se pueden observar un quiasma, o dos en el bivalente mayor, dando lugar a diferentes figuras meióticas. • En diacinesis los cromosomas sexuales se tornan isopicnoticos y se separan. • En metafase I los cromosomas sexuales son diferentes entre si y más chicos que el resto de los bivalentes autosómicos. • En anafase I los cromosomas sexuales segregan ecuacionalmente y los autosomas reduccionalmente. A pesar de su carácter holocinetico los cromosomas se comportan como cromosomas telocéntricos y se denominan telocinéticos. • En metafase II los univalentes sexuales se asocian, formando un pseudobivalente y se ubican en el centro del anillo formado por los autosomas. • En anafase II, los cromosomas sexuales se dividen reduccionalmente. Bandeo DAPI-CMA. Se realizo el bandeo con el fin de caracterizar la composición de la heterocromatina. El fluorocromo DAPI revela zonas ricas en AT mientras que el CMA revela zonas ricas en GC Edessa meditabunda. En diplotene, se distinguen dos bandas CMA+/DAPI- teloméricas en el bivalente mayor. “Lycosa” pampeana. En Diacinesis se observan bandas pericentromericas CMA+/DAPI+. Figura 5. A y B- Diacinesis Lycosa pampeana. C y D-Diplotene Edessa meditabunda. A y C Tincion DAPI. B y D Tincion CMA. Las flechas señalan las bandas CMA+. La punta de flecha señala banda DAPI+. Barra= 10µm DISCUSIÓN CORDINADORES:Liliana Maria Mola, Sergio Rodríguez Gil y Pablo Rebagliati Laboratorio de Citogenética y Evolución, EGE, FCEN, UBA.