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Blutentnahme Serumpräparation Isolierung von Antikörpern

Blutentnahme Serumpräparation Isolierung von Antikörpern. Herzpunktion. Herzpunktion. Herzpunktion. Venenpunktion. Gewinnung und Lagerung von Serum Blut in Zentrifugenröhrchen sammeln Gerinnung bei 37°C (1 Std.) und 4°C über Nacht Zentrifugieren und Überstand sammeln Lagerung von IgG:

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Blutentnahme Serumpräparation Isolierung von Antikörpern

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Presentation Transcript

  1. BlutentnahmeSerumpräparationIsolierung von Antikörpern

  2. Herzpunktion

  3. Herzpunktion

  4. Herzpunktion

  5. Venenpunktion

  6. Gewinnung und Lagerung von Serum Blut in Zentrifugenröhrchen sammeln Gerinnung bei 37°C (1 Std.) und 4°C über Nacht Zentrifugieren und Überstand sammeln Lagerung von IgG: Serum sterilfiltrieren, aliquotieren, gefriertrocknen und bei 4°C oder -20°C lagern; oder Serum in aliquoten Portionen bei -20°C oder -70°C frieren; oder Serum nach Zugabe von Azid bei 4°C lagern Lagerung von IgM Serum sterilfiltrieren, Zugabe von Azid und bei 4°C lagern Isolierte Ig-s sind empfindlicher als Gesamtserum

  7. Isolierung von AK: Aussalzen Proteinfällung durch Zugabe von Neutralsalzen, z.B. :(NH4)2SO4; NaCl; ZnSO4Fällung von Total-Ig: 45% (NH4)2SO4 ph, 7,0 bei 4°CTrennung von IgM, IgG und IgA durch fraktionierte Fällung mit steigenden Mengen an ZnSO4Entfernung der Salze durch Dialyse Elektrodialyse Gelfiltration mit Molekularsieb Ultrafiltration

  8. Isolierung von AK: Ionenaustauschchromatographie

  9. Isolierung von AK: Molekularsiebchromatographie

  10. Isolierung von AK: Isoelektrische Fokusierung

  11. Isolierung von AK: Isoelektrische Fokusierung

  12. Isolierung von AK: Ultrazentrifugation

  13. Isolierung von AK: Affinitätschromatographie

  14. Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie

  15. Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie

  16. Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie

  17. Affinitätsreinigung von Antikörpern mit Anti-Immunglobulinen Anti-Immunglobuline (z. B. Schaf) gegen Fc-Teil eines Antikörpers (z. B. Kaninchen) hergestellt Anti-Immunglobuline (Schaf) an Matrix gebunden Antikörper (Kaninchen) nach Regeln der Affinitätschromatographie gereinigt Matrix - Kaninchen Ig Anti Kaninchen Ig - -

  18. Wechselwirkung AG:AK

  19. AK AK AG AG AK AG Wechselwirkung AG:AK; Affinität Affinität hoch Affinität mittel Affinität niedrig

  20. Wechselwirkung AG:AK; Kreuzreaktion

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