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Praktikum Spezielle Proteinchemie Aufreinigung von FGF-2 2. Teil

Praktikum Spezielle Proteinchemie Aufreinigung von FGF-2 2. Teil. Diafiltration. Cut-off: 3 kD Aufkonzentrieren, entsalzen Kühlung (4 °C) 2 Schritte. Vivaspin 20 centrifugal concentrators: http://ecx.images-amazon.com/images/I/41oReyDPNtL._SL500_AA300_.jpg. Anionenaustauschmembran.

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Praktikum Spezielle Proteinchemie Aufreinigung von FGF-2 2. Teil

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Presentation Transcript

  1. Praktikum Spezielle Proteinchemie Aufreinigung von FGF-2 2. Teil

  2. Diafiltration • Cut-off: 3 kD • Aufkonzentrieren, entsalzen • Kühlung (4 °C) • 2 Schritte Vivaspin 20 centrifugal concentrators: http://ecx.images-amazon.com/images/I/41oReyDPNtL._SL500_AA300_.jpg

  3. Anionenaustauschmembran • Reinigung der FPLC-Anlage mit Salz & Ethanol • Durchfluss wird aufgegangen – gereinigtes FGF-2 • Bradford: 824 mg Anionenaustauschmembran: http://www.sartorius.com/en/product/product-detail/93iexq42db-12-v/

  4. Endotoxin-Assay • Limulus Amöbozyten Lysat • Empfindliche Reaktion auf Endotoxine • Präzipitieren, färben, Photodetektion Wikipedia: Limulus

  5. Ergebnis http://www.criver.com/SiteCollectionDocuments/qc_ra_d_pts_system_brochure.pdf Resultat: weniger als 5 Endotoxin-Units / mL, entsprechend weniger als 5 EU auf 824000 µg FGF-2.

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