UPC II – Microbiologia

1. UPC II – Microbiologia Aula prática laboratorial 1 2012/2013 Maria José Correia mariacorrei@gmail.com 1-10-2012

2. Sumário P1: • Apresentação sucinta do programa das aulas laboratoriais; • Segurança no Laboratório • Noções de desinfeção, assepsia e esterilização • Introdução à microscopia UPC II - Microbiologia 2012/2013

3. Programa: UPC II - Microbiologia 2012/2013

4. Segurança no laboratório: • Atitudes: • Usar o senso comum (a maioria dos acidentes de laboratório começa com algo simples); • Estar consciente – conhecer os reagentes antes de os usar (ler os rótulos tomar as medidas necessárias); • Estar protegido – conhecer as práticas e equipamentos que podem aumentar a proteção (máscaras, luvas, etc.). UPC II - Microbiologia 2012/2013

5. Segurança no laboratório: • Regras gerais: • Nunca COMER, BEBER, FUMAR, aplicar lentes de contacto ou cosméticos! • Nunca cheirar soluções ou reagentes • Nunca pipetar com a boca • Lavar imediatamente a pele após contacto com culturas/químicos UPC II - Microbiologia 2012/2013

6. Segurança no laboratório: É especialmente perigoso correr ou brincar em ambientes laboratoriais UPC II - Microbiologia 2012/2013

7. Segurança no laboratório: • Bancada: • As bancadas de trabalho devem ser mantidas organizadas e limpas • Identificar todo o material utilizando para isso marcadores de vidro apropriados • Manter os bicos de Bunsen e as lamparinas acesas apenas enquanto são necessários • Os lixos devem ser perfeitamente identificados (contaminado e limpo) • O material de vidro estalado ou partido deve ser imediatamente rejeitado • Colocar as pipetas de vidro sujas em contentores de plástico devidamente identificados para esse fim UPC II - Microbiologia 2012/2013

8. Segurança no laboratório: • Proteção pessoal: • Usar bata e manter os cabelos compridos apanhados; • Não usar sapatos abertos, chinelos, sandálias; • Usar a hotte e a CSB sempre que necessário; • Quando abandonar o laboratório retirar a bata e lavar todas as zonas de pele que possam ter estado expostas a substâncias tóxicas/patogénicas. UPC II - Microbiologia 2012/2013

9. Instruções gerais: • Ler os protocolos antes de cada aula prática • Desinfetar as mãos e a bancada • No início da aula examinar/registar os resultados das experiências realizadas na aula anterior • Seguir atentamente as instruções fornecidas pelo docente antes de executar o trabalho proposto • Depois de terminar o trabalho de cada aula arrumar a bancada onde trabalhou. Colocar o lixo e o material inoculado nos locais apropriados • Desinfetar a bancada (álcool) e lavar as mãos com sabonete antes de deixar o laboratório UPC II - Microbiologia 2012/2013

10. Assepsiaausência de microrganismos • Manutenção das condições de assepsia: • limpar e desinfetar a bancada de trabalho • lavar e desinfetar as mãos no início e fim da aula • usar bata limpa (sempre) • esterilizar o material a utilizar • trabalhar à chama ou na câmara de fluxo laminar UPC II - Microbiologia 2012/2013

11. Técnicas de esterilização • Principais agentes anti-microbianos • Métodos físicos • Calor • Radiações • Filtros • Métodos químicos • desinfetante • antisséticos UPC II - Microbiologia 2012/2013

12. Esterilização pelo calor • Calor seco • Oxidação e desnaturação das proteínas • Combustão da matéria orgânica • Aplicações: • Materiais resistentes a altas temperaturas (ansas, vidros não calibrados, etc.) • Equipamento • Estufas a 160-180ºC (2 horas) • Equipamento de incineração ou queima direta UPC II - Microbiologia 2012/2013

13. Esterilização pelo calor • Calor húmido • Coagulação das proteínas; destruição de células vegetativas e esporos • Aplicações: • Meios de cultura e soluções aquosas • Materiais pouco resistentes ao calor (plásticos resistentes, etc.) • Equipamento/técnicas: • Autoclave (atmosfera de vapor de água sob pressão) • Pasteurização (aquecimento do produto por um período de tempo que varia com produto a pasteurizar e a temperatura utilizada) • Tindalização (aquecimento a 65-100ºC durante 30-60 min, intercalado com incubação a 35ºC – ciclos que podem repetir-se até 3 dias) UPC II - Microbiologia 2012/2013

14. Esterilização por filtração Prescott, Microbiology, 5th edition • Remoção de microrganismos em membranas filtrantes com poro nominal inferior às dimensões bacterianas (0,2 µm) • Aplicações: • Produtos termo lábeis, voláteis ou sensíveis a altas pressões (ex: antibióticos e vitaminas) • Equipamento/técnicas: • Filtração com funil (grandes volumes) • Filtração com seringa (pequenos volumes) • Filtração de ar em câmaras de fluxo laminar UPC II - Microbiologia 2012/2013

15. Esterilização por radiações • Raios X e : • Poder ionizante e elevado poder de penetração - para objectos volumosos • Raios UV: • Menor energia, radiação pouco penetrante usada para esterilização de superfícies • Ultra-sons (radiação de alta frequência) • Destruição mecânica de células • Raios catódicos (feixes de electrões de intensidade e velocidade elevadas): • Esterilização de material cirúrgico UPC II - Microbiologia 2012/2013

16. Esterilização por agentes químicos • Agentes bactericidas ou bacteriostáticos (só eliminam as formas vegetativas e não as formas esporuladas) • Sabões, sais biliares e fenóis (alteração da tensão superficial) • Cloro (oxidação de compostos celulares) • Álcoois (desnaturação de proteínas e solubilização de lípidos) Detergentes germicidas: misturas comerciais de vários agentes bactericidas e bacteriostáticos UPC II - Microbiologia 2012/2013

17. Ocular Tubo Revólver Objetiva Coluna Platina Diafragma Condensador Fonte de luz Pé Parafuso Micrométrico Parafuso Macrométrico Introdução à microscopia Prescott, Microbiology, 5th edition • Microscópio ótico • instrumento usado para ampliar • constituído por uma parte mecânica e uma parte ótica UPC II - Microbiologia 2012/2013

18. Microscópio ótico - Parte mecânica • Pé ou Base – suporta/estabiliza o microscópio • Braço ou Coluna – peça fixa à base, serve de suporte a outros constituintes do microscópio. • Tubo ou Canhão –suporta os sistemas de lentes da extremidade superior • Platina – peça paralela à base, onde é colocada a preparação a observar, possuindo no centro um orifício que permite a passagem dos raios luminosos concentrados pelo condensador. • Parafuso Macrométrico – engrenagem indispensável para fazer a focagem. • Parafuso Micrométrico – elemento que permite movimentos de amplitude reduzida para completar a focagem. • Revólver – peça giratória adaptada à zona inferior do tubo que suporta as objetivas de diferentes ampliações (ex: 10x, 40x, 100x) UPC II - Microbiologia 2012/2013

19. Microscópio ótico - Parte ótica • Sistema de Oculares e Sistema de Objetivas – o conjunto de lentes que permitem a ampliação do objecto (a ampliação dada ao microscópio é igual ao produto da ampliação da objetiva pela ampliação da ocular) • Fonte Luminosa • lâmpada (iluminação artificial), • espelho que reflita a luz solar (iluminação natural). • Condensador – conjunto de lentes convergentes que distribui regularmente, sobre o campo visual do microscópio, a luz emitida pela fonte luminosa. • Diafragma –regula a intensidade luminosa no campo visual do microscópio UPC II - Microbiologia 2012/2013

20. Utilização do microscópio • Ligar a lâmpada • Ajustar distância interpupilar (oculares) • Colocar a lâmina na platina e focar em objetiva 10x • Ampliar a imagem, retificar focagem e observar • Utilizar óleo de imersão (1 gota) apenas para a objetiva 100x • Limpar a objetiva com solução apropriada • Quando terminar observação: • Regular a luz para o mínimo e desligar a lâmpada • Voltar sempre para a objetiva de menor ampliação • Cobrir o microscópio UPC II - Microbiologia 2012/2013

21. Objetivos P1: • O aluno deve ser capaz de: • seguir todas as regras de segurança referidas; • definir desinfeção, assepsia e esterilização; • enumerar os principais processos de esterilização de material e meios de cultura; • descrever as situações específicas em que deve ser utilizado um determinado método de esterilização; • descrever o modo de atuação dos métodos de esterilização; • utilizar o microscópio da forma mais correta. UPC II - Microbiologia 2012/2013