180 likes | 337 Views
Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem, Szervetlen és Analitikai Kémiai Tanszék. DNS indukált autokatalitikus rézleválasztás. Jágerszki Gyula. Témavezetők: Dr. Tóth Klára Dr. Gyurcsányi E. Róbert. immobilizált ssDNS felismerő molekula. meghatározandó analát
E N D
Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem, Szervetlen és Analitikai Kémiai Tanszék DNS indukált autokatalitikus rézleválasztás Jágerszki Gyula Témavezetők: Dr. Tóth Klára Dr. Gyurcsányi E. Róbert
immobilizált ssDNS felismerő molekula meghatározandó analát ssDNS Jelölt ssDNS analitikai jel
Nanovezetékek előállítása metallizációval SEM felvételek Ezüst nanohuzal Arany nanohuzal Nano Lett., 4, 2, 323 - 326,2004 réz nanohuzal AFM felvétele IEEE Transactions of Nanotechnology, Vol. 5. No. 2., 2006
M M M M Nehéz fémionok kötődése DNS szálakhoz Adenin Citozin Guanin Anal.Chem. 2005, Vol.77, p5678-p5685
Cu2+ Cu2+ Cu2+ immobilizált ssDNS Cu2+ Cu2+ Cu2+ merkaptohexanol Cu2+ Cu2+ Cu2+ Cu2+ Cu2+ Cu2+ S S levált réz nanoészecskék DNS metallizáció adszorbeált réz ionok Rézionok / Cu(NO3)2 / Redukáló szer / Aszkorbinsav /
DNS metallizáció analitikai felhasználása Feltétele: a szelektív fém leválasztás A nagy érzékenységet az autokatalitikus rézleválasztás biztosítja A, Két lépésben 1. DNS által komplexált fémionok redukciója 2. A kialakult fém magok által indukált fém leválás az autokatalitikus folyamat során B, Egy lépésben Az autokatalitikus oldatban lévő szabad fém ionokat komplexálja a DNS molekula, majd komplexált fém ionok redukciója után megtörténik az autokatalitikus rézleválás
DNS Analát Dezoxiribózfoszfátészter váz PNS Felismerő molekula Peptid-nukleinsav N-(2-aminoetil)glicin váz
Autokatalitikus rézleválasztás • Leválasztó oldat komponensei: • Réz forrás: Cu(NO3)2, CuSO4, CuCl2 • Redukáló szer: formaldehid, dimetil-amin-borán, NaBH4 • Komplexképző: EDTA, tartarát, citrát • Stabilizátor: borsav • ( Puffer ) : tartarát, citrát Ing. Eng. Chem. Res, 1997, 36, 1632-1636
A felület kémiai funkcionalitásának hatása a réz leválasztásra MHT: 1-merkaptohexadekán MCH: 1-merkapto-6-hexanol HEG: 1-merkaptoundekán-hexaetilén-glikol MUA: merkaptoundekánsav Rézleválasztó oldat: CuSO4, formaldehid, Na-K-tartarát, NaOH, pH=12
Rézleválasztás közel semleges pH-án 0,05 M CuCl2 0,06 M dimetil-amin-borán 0,10 M H3BO3 0,10 M Trinátrium-citrát pH=7.3 (0,1 M NaOH-dal beállítva) A leválasztott réz mennyiségének meghatározása Voltammetriás módszerrel Körülmények: 0,1 M citrát puffer pH=5,0 E: -0,3 - 0,8 V / (AgAgCl3 M KCl ) : 5 mV/s
immobilizált DNS adszorbeált Ru3+ Ru Ru Ru Ru kronocoulombmetriás eljárás nFAΓ0 Qdl Immobilizált DNS felületi borítottságának meghatározása Anal.Chem., 1998, Vol.70, p4670-4677
A DNS borítottság hatása azonos körülmények között leválasztott réz mennyiségére DNS borítottság Ru ionok adszorpciójának mértékéből meghatározva A levált réz vissza oldásához szükséges töltés mennyiség DNS: 5’- HS-TTGACCAACAAGA-3’ A levált réz réteg vastagsága Q=10-4 C töltés esetén: n=Q/(z*F)=5,2*10-9 mol m=3,3*10-7 g Elektród (d=2 mm) felülete: A=3,14*10-2 cm2, ρréz=8,96 g/cm3 l=11,7 nm
Aktív felület nagyságának meghatározása Polikristályos aranynál: 0,38 mC/cm2 • ciklikus voltammetria (CV) • 1M-os perklórsavban • 0,2V-1,8V potenciáltartomány • 100mV/s pásztázási sebesség Electroanalytical Chem. and Interfacial El. 1975. (55) 429-443
N2 oldat Rézleválasztás nitrogén atmoszférában Perisztaltikus pumpa elektródok Y Oxigén mentesített oldatok
Eltérő végfunkcionalitású tiolokkal módosított arany elektródokon levált réz mennyiségek MHT: 1-merkaptohexadekán MCH: 1-merkapto-6-hexanol HEG: 1merkaptoundekán-hexaetilén-glikol MUA: merkaptoundekánsav Rézleválasztó oldat pH=7,3
Cu(NO3)2 aszkorbinsav Eltérő bázis számú DNS-sel módosított elektródokon levált réz mennyisége. Autokatalitikus leválasztó oldat
Réz leválás PNS-DNS rendszerben PNS: PNS és MCH módosított DNS: DNS és MCH módosított MH+DNS+VL: DNS-sel módosított és 81 bázis számú komplementer DNS-sel hibridizált MH+PNS+VL: PNS-sel módosított és 81 bázis számú komplementer DNS-sel hibridizált
További feladatok • Független mérési eljárással ellenőrizni a rézleválás mértékét (kvarckristály mikromérleg) • Más hordozó felületek alkalmazása (üveg, polimer membránok) • PNS-DNS, protein-aptamer rendszerek vizsgálata