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Spettroscopie atomiche

Spettroscopie atomiche. Emissione atomica Assorbimento atomico I campioni devono essere mineralizzati. Campione In esame. Conc. HNO 3. Microonde fino a digestione completa. Emissione atomica. D. Monocromatore o filtro. Assorbimento atomico. Bruciatore Fornetto. D. Lente.

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Spettroscopie atomiche

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Presentation Transcript

  1. Spettroscopie atomiche • Emissione atomica • Assorbimento atomico • I campioni devono essere mineralizzati Campione In esame Conc. HNO3 Microonde fino a digestione completa

  2. Emissione atomica D Monocromatore o filtro

  3. Assorbimento atomico • Bruciatore • Fornetto D Lente

  4. Lampada a catodo cavo

  5. Bruciatore

  6. Fornetto di grafite

  7. Fotoni E0 Fotone E0 Fotone E0 Fotone E0 Spettroscopie di diffusione della luce Collisione elastica tra il fotone e la particella L’intensità è dispersa su 4π E E0

  8. Fotoni E0 Fotone E0 Diffusione elastica (Rayleigh) θ Polarizzabilità

  9. E = h v E = h (v±vvib) Diffusione di Raman νvib

  10. Sono attive in Raman le vibrazioni in cui cambia la polarizzabilità

  11. Transizioni attive in IR che possono mascherare lo spettro della biomolecola (es. acqua) non sono attive in Raman

  12. Eccitazione selettiva Segnali intensi (stato eccitato più polarizzabile) Informazioni ristrette al cromoforo e non intera proteina (es. eme, FAD) Resonance Raman

  13. Determinazione colorimetrica di proteine • Misura diretta a 280 nm • Aminoacidi aromatici • Misura diretta a 205 nm • Legame peptidico • Metodi indiretti • Biureto • Folin-Lowry • Acido bicinconinico • Bradford (blu Coomassie G-250)

  14. Bradford Rosso Blu

  15. Biureto Complesso Rame-Proteina in ambiente basico: 540-550 nm

  16. Lowry • Reazione del biureto  Formazione di complessi di Cu(II) e riduzione a Cu(I) da parte di a.a. aromatici • Riduzione di fosfomolibdotungstato (giallo, reattivo di Folin-Ciocalteau) da parte di Cu(I)  colore blu

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