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Spettroscopie biologiche. Tecniche di assorbimento IR UV-Vis Dicroismo circolare Assorbimento atomico Tecniche di emissione Fluorescenza Emissione atomica Tecniche di diffusione Light scattering Raman Resonance raman. Spettroscopia vibrazionale (IR). IR transparent Salt Plates.
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Spettroscopie biologiche Tecniche di assorbimento IR UV-Vis Dicroismo circolare Assorbimento atomico Tecniche di emissione Fluorescenza Emissione atomica Tecniche di diffusione Light scattering Raman Resonance raman
Light Path (shown by red line)
Spettroscopia UV-Vis E s p* hn pp* np* C=C (p-p*) 62 000 cm-1 160 nm H2O (n-p*) 60 000 cm-1 167 nm C=O (n-p*) 34 000 cm-1 295 nm n p s Orbitali di Frontiera HOMO: Highest Occupied Molecular Orbital LUMO: Lowest Unoccupied Molecular Orbital
Spettro di assorbimento della clorofilla: Sono visibili due transizioni principali a 670 nm (rosso) e 430 nm (blu).
ecc I0(n) l I(n) I0(n) C =concentrazione fond Legge di Lambert-Beer:
Cromofori nelle proteine Il legame peptidico (210 nm) Centrato a 280 nm Ponte disolfuro (250 nm)
Cromofori in ambienti asimmetrici assorbono in modo diverso radiazioni polarizzate circolarmente in senso opposto
Ellitticità in relazione alla legge di Lambert-Beer A = Al - Ar = llc - rlc = lc [] = 3298 ∆ • Legame peptidico (180 - 250 nm) • Residui aromatici (250 - 350 nm)
Campione Ioλ1 Sorgente Monocromatori Luce emessa, λ2 Detector Spettrofotofluorimetro
Typical result: Nuclease Folded protein Unfolded protein