Tecniche per la coltura dei B atteri

1. Tecniche per la coltura dei Batteri Roma, 12 marzo 2013

2. Classi 3 E – 3 I Con questa esercitazione abbiamo calcolato il numero di batteri (Escherichia Coli) presenti in una coltura (conta vitale) e ne abbiamo saggiato la resistenza a vari antibiotici (antibiogramma)

3. La conta vitale • Con questa tecnica si contano solo le cellule in grado di dividersi e di dare origine a progenie. • Presupposto: • ogni colonia si è generata da una singola cellula batterica. • Necessita di terreni di coltura appropriati • piastramento di superficie • piastramento da inclusione • in entrambi i metodi per ottenere un conteggio valido devono essere presenti sulla piastra da 30 a 300 colonie. • Piastramento di superficie • Si prelevano 0,1ml dalla sospensione batterica opportunamente diluita e si deposita su piastra Petri contenente il terreno di coltura appropriato, dopo qualche giorno è possibile osservare le colonie e contarle.

4. Antibiogramma: con questa analisi si misura la sensibilità di un microrganismo in coltura nei riguardi di diversi antibiotici. Piastramento da inclusione Operativamente si inocula un terreno di crescita con un microrganismo e si valuta l’effetto inibente la crescita microbica nell’area circostante i vari dischetti di carta contenenti gli antibiotici. L’ampiezza dell’alone di inibizione della crescita del microrganismodipende dalla sensibilità dell’agente patogeno al particolare antibiotico e dalla sua concentrazione.

5. Antibiogramma Si utilizza per determinare l’attività di un antibiotico verso un microrganismo patogeno Analisi degli aloni di inibizione

6. I batteri crescono nel terreno formando una patina opaca. L’antibiotico presente nel dischetto diffonde impedendo la crescita dei batteri

7. Piastre utilizzate per la conta vitale dei batteri • 250 colonie

8. Piastra con antibiogramma • Antibiotici utilizzati: • Ampicillina (Ap) • Kanamicina (Km) • Tetraciclina (Tc) • Streptomicina (Sm) • Le concentrazioni di antibiotico contenute nei dischetti sono dosate sulla base delle rispettive quantità utilizzabili in terapia

9. I nostri risultati

12. Dati Sperimentali

18. Conclusioni • Antibiotico migliore per effettuare la terapia: Ampicillina (alone dell’inibizione della crescita dei batteri statisticamente e sistematicamente maggiore per tutti i gruppi di lavoro) • In base alla loro efficienza statistica relativa la scelta di un antibiotico alternativo cadrebbe dapprima sulla Kanamicina e infine sulla Tetraciclina • Batteri resistenti alla Streptomicina (assenza di alone di inibizione batterica)