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Présenté par: - Nathalie ROUSSEAU -Sarah MERAD - Adiza SEYDOU

Master MICROBIOLOGIE, ECOLOGIE Parcours Recherche « Ecologie Microbienne » Université Claude Bernard Lyon 1 Secrétariat : Batiment G.Mendel - 4éme étage 43 boulevard du 11 novembre 1918 69 622 VILLEURBANNE CEDEX Tél : 04 78 77 86 57 - Fax : 04 78 77 86 58

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Presentation Transcript

  1. Master MICROBIOLOGIE, ECOLOGIE Parcours Recherche « Ecologie Microbienne » Université Claude Bernard Lyon 1 Secrétariat : BatimentG.Mendel- 4éme étage 43 boulevard du 11 novembre 1918 69 622 VILLEURBANNE CEDEX Tél : 04 78 77 86 57 - Fax : 04 78 77 86 58 Courriel : master2. ecomi@univ-lyon1.fr Présenté par: - Nathalie ROUSSEAU -Sarah MERAD -Adiza SEYDOU Identification des déterminants de virulence de Haemophilusducreyi responsable d’ulcére par la technique STM-Signature-TaggedMutagenesis -

  2. Introduction • Haemophilusducreyi(bacille de Ducrey) coccobacille, Gram – • sexuellement transmissible • chancre mou facteur favorisant la pénétration et transmission de VIH • Ulcérations génitales • Prostituées • Hommes++++ • Femmes ++

  3. Introduction Objectif Identifier in-vivo les facteurs de virulence responsables de la formation d'ulcères exprimés dans le génome d’H. ducreyipar technique STM.

  4. Matériels et méthodes • Souches utilisées: Haemophilusducreyisauvage 35000HP H. ducreyitransformée électroporation E-coli TOP10: cellule hôte clonage • Modèle animal: TDRM Temperature-dependentrabbit model

  5. Matériels et méthodes Signature-TaggedMutagenesis -STM- méthode de sélection négative But : détecter les gènes de virulence (ou gènes indispensables à l’infection) dans le génome bactérien • Technique : • Inactivation aléatoire de gènes grâce à des transposons • Comparaison in vitro/in vivo des souches sauvages et mutantes

  6. Matériels et méthodesPrincipe général

  7. Matériels et méthodes • Construction des STM • Construction du STM contrôle positif • Obtention des souches mutantes d’ H. ducreyi(pool de mutants) • Inoculation à l’animal • Comparaison « input » - « output » : PCR

  8. Clonage dans E.coli TOP 10

  9. Matériels et méthodes • Obtention des souches mutantes d’ H. ducreyi • Incorporation des plasmides construits dans H. ducreyipar électroporation • Insertion uniqueet aléatoire des transposons + tag dans génome bactérien  « Bibliothèques » de mutants : # 500 mutants • Mise en culture • Sélection des souches mutantes de croissance rapide (essais de compétition) : pool « input » = pool in vitro • Inoculation à l’animal  pool « output » = pool in vivo

  10. Inoculation à l’animal et comparaison des pool input et ouput

  11. Résultats et discussion Gènes virulents : • hgbA (contrôle positif) • hicB Gènes associés à une faible virulence : • dnaK • tdhA

  12. Conclusion Les gènes responsables de la pathogenèse d’H. ducreyipeuvent servir de cibles thérapeutiques potentielles pour le traitement du chancre mou.

  13. Merci pour votre attention

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