IXème Congrès National d’Hématologie-Tlemcen 2012

1. Benchikh.N1; Nachi.M1 ; Moussaoui.R1 ; Belarbi.CF1 ; Messaoudi.A1; Arabi.A2;Bekadja.MA2 ; Zatla.L3 ; Touhami.H3 ; Zouaoui - Benhadji.Z4 ; Mesli.N5; Benmansour. M; Mehalhal.N6.1.Service de Biochimie, EHU 1er novembre, Oran ,Algérie2.Service d’Hématologie et de Thérapie Cellulaire, EHU 1er novembre, Oran, Algérie.3.Service d’Hématologie, CHU Oran, Algérie.4.Service d’Hématologie, CHU Sidi-Bel-Abbès, Algérie.5.Service d’Hématologie, CHU Tlemcen, Algérie.6.Service d’Hématologie, EPH de Mascara, Algérie. La recherche de la mutation JAK2 V617F au cours des syndromes myéloproliferatifs au niveau de l’Ouest Algérien. Etude multicentrique portant sur 255 patients. IXème Congrès National d’Hématologie-Tlemcen 2012

2. Introduction

3. Une mutation acquise du gène Janus Kinase 2 (JAK2) qui transforme valine en phénylalanine en position 617 (V617F) est impliquée de façon certaine dans la pathogénie des syndromes myéloprolifératifs .

4. La mutation JAK2 V617F est située dans le domaine JH2 ou domaine pseudo-kinase de JAK2, qui régule négativement l’activité kinase de la protéine.

5. Elle entraîne une activation de la voie de signalisation même en l’absence de cytokines essentielles pour l’hématopoïèse (EPO, TPO, G-CSF). • La mutation entraine donc une activation constitutive du signal dans les cellules de la lignée myéloïde et une production excessive de cellules sanguines matures.

6. La mutation JAK2 V617F est présente dans plus de 90% des PV et environ 50% des TE et des MFP. Levine RL, et al., Nature Reviews Cancer, 2007

7. L’objectif de notre travail, est de rapporter le bilan d'activité de la recherche de la mutation V617F JAK2 au niveau de notre établissement hospitalier.

8. Matériel et méthodes

9. Etude rétrospective (multicentrique, régionale). • 255 patients • Mars 2009 - Janvier2012, • Services d’hématologie de l’Ouest Algérien. • EHU Oran • CHU Oran • HMRU Oran • CHU Tlemcen • CHU SBA • EPSP de Mascara, Mostaganem, Saïda, Ain Témouchent, Ain Turk.

10. Les patients ont été répartis en six groupes de pathologies en fonction des renseignements cliniques transmis au laboratoire: • Polyglobulie primitive ou secondaire • Thrombocytémie • SMP atypique • Splénomégalie myéloïde • Myélofibrose • Maladie thrombo-embolique

11. Techniques de génotypage de JAK2 • Extraction d’ADN à partir de 10 ml de sang total prélevé sur tube EDTA. • Recherche de la mutation V617F du gène JAK2: PCR allèle spécifique ou ARMS-PCR (Chen et al., 2007)

12. Principe de la réaction de PCR

13. CTCTCTCTCACTTTGATCTCCATATTCCAGGCTTACACAGGGGTTTCCTCAGAACGTTGATGGCAGTTGCAGGTCCATATAAAGGGACCAAAGCACATTGTATCCTCATCTATAGTCATGCTGAAAGTAGGAGAAAGTGCATCTTTATTATGGCAGAGAGAATTTTCTGAACTATTTATGGACAACAGTCAAACAACAATTCTTTGTACTTTTTTTTTTCCTTAGTCTTTCTTTGAAGCAGCAAGTATGATGAGCAAGCTTTCTCACAAGCATTTGGTTTTAAATTATGGAGTATGTGTCTGTGGAGACGAGAGTAAGTAAAACTACAGGCTTTCTAATGCCTTTCTCAGAGCATCTGTTTTTGTTTATATAGAAAATTCAGTTTCAGGATCACAGCTAGGTGTCAGTGTAAACTATAATTTAACAGGAGTTAAGTATTTTTGAAACTGAAAACACTGTAGGACTATTCAGTTATATCTTGTGAAAAAGGAAAGCAATGAAGTTAAAAGTAGAAGGTTACAATGCCCAAACAATAGAGTATTACTCTCTCTCACTTTGATCTCCATATTCCAGGCTTACACAGGGGTTTCCTCAGAACGTTGATGGCAGTTGCAGGTCCATATAAAGGGACCAAAGCACATTGTATCCTCATCTATAGTCATGCTGAAAGTAGGAGAAAGTGCATCTTTATTATGGCAGAGAGAATTTTCTGAACTATTTATGGACAACAGTCAAACAACAATTCTTTGTACTTTTTTTTTTCCTTAGTCTTTCTTTGAAGCAGCAAGTATGATGAGCAAGCTTTCTCACAAGCATTTGGTTTTAAATTATGGAGTATGTGTCTGTGGAGACGAGAGTAAGTAAAACTACAGGCTTTCTAATGCCTTTCTCAGAGCATCTGTTTTTGTTTATATAGAAAATTCAGTTTCAGGATCACAGCTAGGTGTCAGTGTAAACTATAATTTAACAGGAGTTAAGTATTTTTGAAACTGAAAACACTGTAGGACTATTCAGTTATATCTTGTGAAAAAGGAAAGCAATGAAGTTAAAAGTAGAAGGTTACAATGCCCAAACAATAGAGTATTA

15. 463 pb 279 pb 229 pb

16. Résultats & discussion

17. Répartition des patients selon les établissements hospitaliers

18. Répartition selon les établissements hospitaliers

19. Répartition des patients selon le diagnostic suspecté

20. Répartition selon le Syndrome myéloprolifératif suspecté

21. Résultats du génotypage de JAK2 V617F

23. Conclusions

24. Notre étude est la première à évaluer la mutation JAK2 V617F chez des patients avec un SMP diagnostiqué ou suspecté en Algérie. • La méthode choisie: rapide, sensible et peu couteuse. • Nos résultats confirment que la découverte de cette mutation a considérablement révolutionné le diagnostic des SMP.

25. L’absence de la mutation V617F JAK2 devrait nous inciter à rechercher d’autres mutations (mutation du récepteur de Tpo « mutation W515L», mutations de l’exon 12 de JAK2 …). • L’utilisation de la mutationV617F JAK2 en tant que marqueur quantitatif par PCR en temps réel de suivi de réponse au traitement au cas où une thérapie ciblée verra le jour.

26. 26