Carine LOUIS

1. Evaluation ex vivo et in vitro de l ’expression des gènes majeurs de l ’apoptose dans le cancer du sein Carine LOUIS Responsable scientifique: Dr Rosette LIDEREAU Laboratoire d'Oncogénétique / E0017 INSERM Directeur:Dr Rosette Lidereau Centre René Huguenin, St-Cloud

2. INTRODUCTION GENERALE Cancer du sein : • Maladie sporadique. • Progression tumorale : Plusieurs mécanismes. Apoptose : • Régulation complexe. • Dérégulation dans la progression tumorale : Deux types de gènes altérés (gènes suppresseurs de tumeur et oncogènes).

3. RFS FAS TNFR1/2 TRAILR1/2 D A X X F A D D T R A D D T R A D D T R A D D T R A D D R A I D D Caspase 8/10 F A D D Caspase 2 F A D D FLIP R I P R I P PTEN PI3K AKT + PDK T R A F 2 T R A F 2 Caspase 8/10 BAD BID BAD BAD BCL-XL 14.3.3 IAP ( SURVIVINE) BAK SMAC BCLG BAX BCL-XL Caspase 7 Caspase 9 Caspase 3 BIK BCL-XL Cytochrome C BIM Caspase 6 BCL2 APAF1 ICAD PARP Pro-casp9 BCLW, Mcl-1 BAK BAG BCL2 CAD Lamine A Actine BAX Autres Substrats PIDD, PUMA, NOXA AIF BCL-XS Contraction cellulaire Déformation membranaire Fragmentation ADN Réparation ADN BAX p53 Autres Oncogènes MDM 2 p19ARF MYC p73 APOPTOSE ATR/ATM Lésion ADN Hypoxie

4. QUESTIONS Etude des profils d’expression des gènes de l ’apoptose dans le cancer du sein et leur implication dans la progression tumorale. Recherche de marqueurs prédictifs à la réponse des patientes au traitement par chimiothérapie. Etude de ces gènes dans un modèle expérimental induit en apoptose.

5. SELECTION DE GENE Analyse bibliographique, in silico : Sélection de 41 gènes d ’apoptose + séquences d ’amorces spécifique . RT-PCR quantitative en temps réel Analyse préliminaire ex vivo (6 tumeurs et 2 tissus normaux) : Sélection de 25 gènes apoptotiques d ’intérêt.

6. PROFILS D ’EXPRESSION Surexpression significative : SURV 94% NOXA 73% Sous-expression significative : CASP10 82% BCL2 67% Expression complexe : SMAC PIDD Sous-expression faible : BAD,AIF, BCLW 4 profils :

7. RECHERCHE DE MARQUEURS PREDICTIFS Recherche d’expression en relation avec l’apparition de rechute (ROC) : 6 gènes candidats (MYC, BAD, BAX, TRADD, FAS et NOXA). Regroupement des tumeurs en fonction de l’expression de ces gènes (GeneANOVA) : Le couple MYC-BAD permet une meilleure discrimination des tumeurs.

8. M 192 Groupe A 21% M 182 M 129 M 379 M 1227 M 1279 M 150 M 1122 M 283 Groupe B 73% M 1240 M 310 M 284 M 297 M 1265 M 1250

9. VERIFICATION DE LA VALEUR PREDICTIVE Courbes de survie sans rechute : HYPOTHESE : MYC surexprimé BAD sous-exprimé MEILLEURE REPONSE A LA CHIMIOTHERAPIE PROLIFERATION

10. REGROUPEMENT DES GENES EN FONCTION DE LEUR EXPRESSION DANS LES TUMEURS GeneANOVA : Regroupement des gènes étudiés en fonction de leurs profils d ’expression dans les 34 tumeurs. 6 groupes de gènes mis en évidence : Les groupes de gènes identifiés représentent souvent des voies de signalisation différentes.

11. Groupe n°1 Groupe n°2 Groupe n°3 Groupe n°4 Groupe n°5 Groupe n°6 R1

12. PUMA BCL2 Mitochondrie NOXA REGROUPEMENT DES GENES EN FONCTION DE LEUR EXPRESSION DANS LES TUMEURS Le groupe n° 1 est constitué de gènes associés à la prolifération : Ki-67, Survivine, p19, MYC. Le groupe n° 6 est constitué de gènes intervenant dans une même voie de signalisation pro-apoptotique :

13. FADD CYTOC 12,00 RAIDD SMAC MDM2 BCLG 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 0 10 nM 25 nM 50 nM 100 nM 150 nM ETUDE IN VITRO Expression au cours de l’apoptose dans un modèle cellulaire : • Non exprimés: Caspase 10 et TNFR2 • Surexprimés : MDM2, p19, TRADD, NOXA • Sous-exprimés : BIK • Pas de variation : Survivine, ... BAK1 P19 SURV CASP3 PUMA NOXA AIF BCL2 BAX BCLW CASP10 TNFR2 TRADD BAD TRAIL FAS PIDD BIK MYC

14. CONCLUSION ET PERSPECTIVES NOS RÉSULTATS : - Variations d’expression de nombreux gènes d’apoptose dans les tumeurs et le modèle induit. - MYC et BAD Marqueurs prédictifs. PERSPECTIVES : - Analyse à plus grande échelle. - Profil d’expression des gènes dans les tumeurs secondaires et au cours du traitement par chimiothérapie. - Nouvelles cibles thérapeutiques :BAD ?