Departamento de Farmacologia e Departamento de Morfologia ICB-UFMG

1. ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE MARCADORES MICROSATÉLITE EM DE Prochilodus scrofa PROSDOCIMI, Francisco C. S.; ZUCCONI, Eder; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; ANDRADE, Renato (c); GODINHO, Hugo (c);GODINHO, Alexandre (c) Departamento de Farmacologia e Departamento de MorfologiaICB-UFMG

2. As construções de barragens hidrelétricas nas grandes bacias fluviais do país, apesar de reconhecidos aspectos utilitários, causam impactos sobre a ictiofauna, como a interrupção de vias migratórias de peixes. Nesses casos, segundo a legislação vigente, é obrigatória a construção de mecanismos – altamente dispendiosos – de transposição de peixes, a não ser que seja comprovado que tal medida é desnecessária. Para verificar a necessidade de construção desses mecanismos em barragens do Rio Grande (MG), deve ser feito um estudo de variabilidade genética entre populações de peixes locais. Com esse objetivo estão sendo isolados e caracterizados locos de microsatélites da espécie Prochilodus scrofa, conhecida popularmente como curimbatá. Para o isolamento desses locos foi construída uma biblioteca de DNA genômico do peixe, que foi hibridizada com seqüências de oligonucleotídeos repetitivas marcadas radioativamente. Os clones positivos estão sendo seqüenciados para a confirmação das regiões de microsatélites e para o reconhecimento das regiões flanqueadoras. Primers complementares às regiões flanqueadoras estão sendo encomendados e está sendo caracterizada a reação de PCR a ser utilizada no estudo genético de populações desses peixes. Resumo

3. Crescimento populacional Maior demanda de energia elétrica Construção de represas • Biblioteca Genômica Interrupção de vias migratórias • Isolamento dos clones • Hibridização • Sequenciamento O Problema Metodologia

4. Biblioteca de DNA Genômico Resumo da técnica de montagem de biblioteca genômica Corte do DNA total com Sau3A Escolha da enzima apropriada para a montagem da biblioteca Sítio de corte da enzima utilizada deixando extremidades coesivas Mapa do vetor utilizado Divisão das frações da biblioteca Técnica de transformação bacteriana utilizada (eletroporação)

5. Isolamento dos clones Hibridização Hibridização com sondas radioativas Oligonucleotídeos utilizados como sonda: CA, TC, CTT, ACGA, TA, GGA, AAAG,TATC Isolamento dos clones da biblioteca seguido de PCR ou mini-prep para a posterior aplicação na membrana Uma das membranas utilizadas. Pode-se perceber que os clones foram aplicados em duplicata.

6. Sequenciamento Equipamento de Sequenciamento automático utilizado Seqüência de um dos microsatélites encontrados Seqüência de outro dos microsatélites encontrados

7. Estudo Populacional • PCR dos loci de microsatélite de cada indivíduo. • Gel de poliacrilamida dos produtos de PCR • Montagem de tabela com nº e freqüência de MS. • Cálculo da heterozigosidade observada e esperada. • Definição da distância genética e fluxo gênico entre as populações. • Verificação da necessidade de construção Perspectivas de mecanismos de transposição. • Teste de paternidade • Novos sequenciamentos • Coleta de peixes