1 / 21

Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych

Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych. Choroba dziedziczna. schorzenie spowodowane przez mutacje jednego lub wi ę cej ge nó w lub te ż aber r acj ę chromosomaln ą przekazywane w rodzinie w kolejnym pokoleniu

kagami
Download Presentation

Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych

  2. Chorobadziedziczna • schorzenie spowodowane przez mutacje jednego lub więcej genów lub też aberrację chromosomalnąprzekazywane w rodzinie w kolejnym pokoleniu • zmiany w DNA zostają przekazane w gametach rodziców bądź też pojawiają się we wczesnych etapach rozwoju zarodkowego (jako mutacje de novo)

  3. Test genetyczny • analiza ludzkiego DNA, RNA, chromosomów, białek i określonych metabolitów • umożliwia identyfikację odpowiednich genotypów, mutacji, fenotypów lub kariotypu • wykonywany do celów klinicznych i poradnictwa genetycznego

  4. Cel wykonywania testu genetycznego • zdiagnozowanie genetycznej przyczyny choroby lub • wykazanie, że osoba posiada jedna lub więcej zmian genetycznych: • mogących spowodować rozwój choroby lub • mogących wywołać chorobę u potomstwa lub • mających znaczenie dla postępowania leczniczego.

  5. Testy genetyczne oparte na analizie DNA • niezależne od znajomości patogenezy choroby • niezależne od ekspresji badanego genu • wynik testu niezależny od momentu wystąpienia objawów klinicznych czy zmian w środowisku mogących wpływać na ujawnienie się kliniczne genotypów • wynik testu stały w ciągu całego życia

  6. Materiał do badań DNA - krew obwodowa, - hodowla fibroblastów skóry, - plamy krwi, - komórki nabłonka jamy ustnej, - cebulki włosowe, do badań prenatalnych: - komórki płynu owodniowego, - komórki trofoblastu (możliwość analizy w I trymetrze ciąży) Specyficzność analizy nie zależy od rodzaju tkankiużytej do badania.

  7. Strategie metodyczne w diagnostyce molekularnej analiza sposobu dziedziczeniadanego genu (analiza sprzężeń) bezpośrednia analiza mutacji

  8. Analiza sposobu dziedziczenia (analiza sprzężeń) • polega na na śledzeniu w rodzinieprzekazywania określonego markera genetycznego sprzężonego ze zmutowanym genem • wykorzystuje fakt kosegregacji loci markera i genu powodującego chorobę – marker i gen ze względu na bliskie położenie na chromosomie dziedziczą się wspólnie

  9. Markery genetyczne stosowane w analizie sprzężeń Marker genetyczny– dowolna sekwencjaDNA możliwa do identyfikacji, występująca w co najmniej dwóch formach allelicznych 1. SNP - Southern blotting, - PCR-RFLP, - PCR-ASO, - sekwencjonowanie, - mikromacierze 2. Sekwencje powtórzone (np. mikrosatelitarne) - ocena wielkości produktu PCR w żelu poliakrylamidowym

  10. Analiza sposobu dziedziczenia (analiza sprzężeń) • możliwa nawet przy brak znajomości/możliwościbezpośredniej identyfikacji mutacji chorobotwórczej • koniecznośćbadania rodziców chorego • nie służy do weryfikacji rozpoznania klinicznego (opiera się na nim) • umożliwia wykrycie nosicielstwa u krewnych chorego • obciążona ryzykiem błędu wynikającego ze zjawiskarekombinacji (badanie co najmniej dwóch markerów)

  11. Analiza sposobu dziedziczenia markera XV2C sprzężonego z genem CFTR w rodzinie ryzyka mukowiscydozy.

  12. Strategie metodyczne w diagnostyce molekularnej analiza sposobu dziedziczeniadanego genu (analiza sprzężeń) bezpośrednia analiza mutacji

  13. Bezpośrednia analiza mutacji • weryfikuje rozpoznanie kliniczne • brak ryzyka błędu diagnostycznego wynikającego zezjawiska rekombinacji • konieczna znajomość mutacji powodującej chorobę Współczesna rutynowa diagnostyka molekularna – głównie analiza znanych mutacji.

  14. Bezpośrednia analiza mutacji poszukiwanie konkretnej mutacji/grupy mutacji przeszukiwanie genu

  15. Przeszukiwanie genu • nie wiadomo, która z licznych mutacji powodujedefekt genu • w populacji brak mutacji specyficznych o dużej częstości występowania sekwencjonwanie, poprzedzone badaniem metodą przesiewową (SSCP, HA, DGGE)

  16. Bezpośrednia analiza mutacji przeszukiwanie genu poszukiwanie konkretnej mutacji/grupy mutacji

  17. Poszukiwanie konkretnej mutacji- mutacje punktowe 1) analiza restrykcyjna - PCR-RFLP - Southern blotting 2) PCR-ASO 3) sekwencjonowanie 4) mikromacierze DNA

  18. Analiza mutacji punktowej w genie -globiny powodującej anemię sierpowatokrwinkową (Southern blotting).

  19. Poszukiwanie konkretnej mutacji–insercje, delecje, duplikacje 1) analiza wielkości produktu PCR – małe delecje 2) Southern blotting – duże delecje lub duplikacje, – duże powtórzenia trójnukleotydowe,

  20. Analiza delecji 508 w rodzinie ryzyka mukowiscydozy (analiza długości produktu PCR)

  21. 1. Czym spowodowane są choroby dziedziczne? 2. Co to jest test genetyczny i do czego służy? 3. Jaki materiał stosuje się do badania DNA w diagnostyce chorób dziedzicznych? 4. Na czym polega i do czego służy analiza sposobu dziedziczenia? 5. Na czym polega przeszukiwanie genu? Jakie techniki się tu wykorzystuje?

More Related