Vitrifikacija oocita i sekundarni ICSI – doprinos kumulativnom uspjehu liječenja

1. Vitrifikacija oocita i sekundarni ICSI – doprinos kumulativnom uspjehu liječenja 1Patrik Stanić, 1Višnja Hlavati, 2Sanda Koprivc Varga i 2Danko Dobec 1Klinika za ženske bolesti i porode Kliničkog bolničkog centra Zagreb 2Poliklinika IVF Zagreb

2. Priprema hranilišta i otopina Izdvajanje i koncentriranje spermija Stimulacija jajnika Aspiracija folikula Izdvajanje oocita IVF/ICSI Prikupljanje ejakulata Kriopohrana Sekundarni ICSI Kultivacija 18-20 h Kriopohrana Potvrda oplodnje (2PRN) Promjena hranilišta Kriopohrana Kultivacija 24 h Broj i morfologija zametaka Kultivacija gameta i zametaka Transfer embrija 2/3 dan Kultivacija 24 h Promjena hranilišta Kultivacija 24-48 h Transfer morula/blastocista

3. Kumulativno povećanje stupnja trudnoća po aspiriranim oocitama IVF/ICSI ZAMRZAVANJE EMBRIJA ZAMRZAVANJE OOCITA KUMULATIVNO TRUDNOĆE (najrelevantniji indeks uspjeha)

4. Indikacije za zamrzavanje humanih embrija • smanjenje broja transferiranih embrija • smanjenje višeplodnih trudnoća • odgoda ET (OHSS, endometralni polip) • zakonske odredbe o zabrani ET više od jednog embrija

5. Indikacijezazamrzavanjehumanih oocita • kemoterapija ili radijacijska terapija • kirurške operacije na spolnom sustavu • donorska banka oocita • odgađanje majčinstva • zakonske odredbe o ograničenju broja oplođenih oocita

6. Procesizamrzavanjaiodmrzavanja • toplinski šok • unutarstanično stvaranje kristala leda • dehidracija i rehidracija • početna kvaliteta gameta i zametaka • sastav medija za zamrzavanje • postupak zamrzavanja i odmrzavanja

7. Moguća oštećenja oocita tijekom kriopohrane Utjecaj na fiziologiju i starenje oocite Oštećenja citoplazme i citoskeleta Propusnost membrane Stvrdnuće zone pellucide Depolimerizacija diobenog vretena Degeneracija polarnog tjelešca

8. Kriopohrana oocita –odabir metode, medija i nosača • Sporo zamrzavanje • COOK, MediCult, Vitrolife • Vitrifikacija • Kitazato, MediCult, Irvine Scientific • cryotop • cryoleaf • cryoloop • cryotip

9. Krioprotektori • Permeabilni krioprotektori • glicerol, etilenglikol (EG), 1,2-propandiol (PROH), dimetilsulfoksid (DMSO) • dehidracija • smanjenje točke ledišta • ne toksični • Ne permeabilni krioprotektori • saharoza • osmotski pufer

10. Postupcizamrzavanja • Kontrolirano sporo zamrzavanje (Whittingham et al., 1972) • Vitrifikacija - ultra brzo zamrzavanje (Rall & Fahy, 1985)

11. Sporo zamrzavanje vs vitrifikacija • sporo zamrzavanje • 50-76% stupanj preživljenja • 13-38% stupanj trudnoća/ET (Porcu 2000, Boldt 2006, Borini 2007) • 91% stupanj preživljenja (La et al., 2010) • vitrifikacija • 63-100% stupanj preživljenja • 6,4-61% stupanj implantacije (Cobo, 2009)

12. Sporo zamrzavanje vs vitrifikacija • mnoge studije su retrospektivne, ne komparativne • podaci o trudnoćama nedostatni za analize • preživljenje embrija/blastocista favorizira vitrifikaciju (Loutradi, 2008) • razvoj do stadija blastociste iz zamrznutih embrija u stadiju diobe favorizira vitrifikaciju • nema statistički značajne razlike u stupnju kliničkih trudnoća/ET

13. Vitrifikacija oocita: rezultati Cryotop metode Cryotop metoda EG / DMSO + saharoza Kuwayama M. Theriogenology 2007.

14. Vitrifikacija oocita: rezultati Cryotop metode Cobo et al., Fertil Steril 2007.

15. Vitrifikacija oocita - McGill Reproductive Center Chian et al. (2005) ASRM Annual Meeting

16. Nove strategije u kliničkoj primjeni –IVM + vitrifikacija oocita • pacijentice oboljele od malignih bolesti • IVM postupak nezrelih oocita + vitrifikacija • izbjegnuta hormonska stimulacija • odgoda majčinstva • IVM postupak nezrelih oocita + vitrifikacija • čuvanje plodne sposobnosti • program donacije oocita • potencijalna donorica izbjegava hormonsku stimulaciju

17. Trudnoće nakon vitrifikacije oocita u mladih plodnih pacijentica Kim TJ et al., Fertil Steril 2010

18. Klinički ishod – sporo zamrzavanje oocita neplodnih pacijentica Borini et al., Fertil Steril 2010

19. Kumulativni rezultati – trudnoće prije i nakon uvođenja ograničenja oplodnje 26% Borini et al., 2008.

20. Klinički ishod – vitrifikacija oocita neplodnih pacijentica Rienzi et al., Human Reproduction 2009

21. Kumulativni rezultati – trudnoće nakon svježeg ciklusa te vitrifikacije oocita u neplodnih pacijentica Rienzi Laura. Oral Presentation ESHRE Campus 2010 “The search for excellence in IVF: a practical approach”

22. KLINIČKI BOLNIČKI CENTAR ZAGREB Kumulativni rezultati za 2010 godinu– trudnoće po stimuliranom ciklusu u neplodnih pacijentica sa zamrznutim oocitama

23. POLIKLINIKA IVF ZAGREB Kumulativni rezultati za 2010 godinu– trudnoće po stimuliranom ciklusu u neplodnih pacijentica sa zamrznutim oocitama