1 / 90

VIRUSOLOĢIJA (VĪRUSI UN ĀRPUSHROMOSOMU ĢENĒTISKIE ELEMENTI)

VIRUSOLOĢIJA (VĪRUSI UN ĀRPUSHROMOSOMU ĢENĒTISKIE ELEMENTI). PĒTĪŠANAS METODES. Bioloģiskā bīstamība (Biohazard). Bioloģiskās drošības līmeņi. Bioloģiskās drošības līmeņi. http://media.thestar.topscms.com/images/. II drošības klases laminārās gaisa plūsmas bokss.

kylynn-jenkins
Download Presentation

VIRUSOLOĢIJA (VĪRUSI UN ĀRPUSHROMOSOMU ĢENĒTISKIE ELEMENTI)

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. VIRUSOLOĢIJA (VĪRUSI UN ĀRPUSHROMOSOMU ĢENĒTISKIE ELEMENTI) PĒTĪŠANAS METODES

  2. Bioloģiskā bīstamība (Biohazard)

  3. Bioloģiskās drošības līmeņi

  4. Bioloģiskās drošības līmeņi http://media.thestar.topscms.com/images/

  5. II drošības klases laminārās gaisa plūsmas bokss HEPA filtrs high efficiency particulate air III drošības klases laminārās gaisa plūsmas bokss I drošības klases bokss

  6. HEPA filtrs high efficiency particulate air Kritiskais daļiņu lielums -0,3 mm 1,0-0,5 mm >1,0 mm < 0,2 mm

  7. VĪRUSU AUDZĒŠANA Saimniekorganisms vai aizvietotājs Dimitrijs Ivanovskis [Ивановский] (1864. - 1920.) Martins Beijerniks [Beijernick] (1851.-1931.) Tabakas mozaīkas vīruss 1892. un 1898. gadā

  8. VĪRUSU AUDZĒŠANA Saimniekorganisms vai aizvietotājs Frīdrihs Leflers [Loeffler] (1852 -1915) 1898., lielopu mutes un nagu sērgas izraisītāju neaiztur keramikas filtri

  9. VĪRUSU AUDZĒŠANA Saimniekorganisms vai aizvietotājs

  10. VĪRUSU AUDZĒŠANA Saimniekorganisms vai aizvietotājs

  11. VĪRUSU AUDZĒŠANA Saimniekorganisms vai aizvietotājs Felikss d’Errels [d’Herelle] (1873. - 1949.) Frederiks Tvorts [Twort] (1877.-1950.) Bakteriofāgi, 1915. - 1917.g.

  12. VĪRUSU AUDZĒŠANA Saimniekorganisms vai aizvietotājs

  13. VĪRUSU AUDZĒŠANA Saimniekorganisms vai aizvietotājs

  14. Makss Delbruks [Delbruck] (1906. - 1981.) Salvatore Luria [Luria] (1912.-1991.) Vīrusu replikācijas mehānisms 1948./49. g.g., NP - 1969.g.

  15. Saimniekorganisms vai aizvietotājs Fāga titrēšana, negatīvo koloniju tipi

  16. Saimniekorganisms vai aizvietotājs Vistas embrija sistēma Permisīvi un nepermisīvi organismi/audi/šūnas

  17. Vīrusu inokulācija vistas embrija sistēmā Baku vakcīnas un baku vīrusu veidotie mezgli uz vistas embrija horioalantoja membrānas

  18. Šūnu kultūra

  19. Šūnu kultūra Barotnes sastāvs Harijs Īgls (Eagle)

  20. Šūnu kultūra Kultivēšanas telpas, invertētais mikroskops

  21. Šūnu kultūra Kultūru tipi

  22. Šūnu kultūra Džons Enders [Enders] (1897. - 1985.) Tomass Vellers [Weller] (1915. – 2008.) Frederiks Robins [Robbins] (1916. – 2003.) Poliomielīta vīrusa audzēšana šūnu kultūrā 1949./50. g.g., NP - 1954.g.

  23. Šūnu kultūra Monoslāņi un daudziedobju plates

  24. Šūnu kultūra Laminārās plūsmas boksi

  25. Šūnu kultūra Pipetēšanas sistēmas

  26. Šūnu kultūras inficēšana ar vīrusa NS (transfekcija) Īslaicīga transfekcijaStabila transfekcija (ar integrāciju genomā) Transfekcija ar ķīmiskām metodēm

  27. Transfekcija ar fizikālām metodēm elektroporācija; optoporācija; transfekcija ar magnētiskām daļiņām; balistiskā transfekcija http://cdn2.bigcommerce.com/

  28. Šūnu kultūra CPE veidi

  29. Renato Dalbeko [Dulbecco] (1914.-2012.) Vīrusu citopātisko un onkogēno īpašību pētījumi šūnu kultūrās; NP - 1975

  30. VĪRUSU IZMĒRI Parvoviruss Mimiviruss

  31. VĪRUSU IZMĒRI 1 mikrometrs

  32. VĪRUSU (PLAZMĪDU) IZDALĪŠANA Šūnu dezintegrēšana Šūnu ekstraktu frakcionēšana un koncentrēšana Vīrusa (plazmīdas) attīrīšana

  33. Šūnu dezintegrēšana • Mehāniskās metodes - saberzšana, samalšana, saspiešana, ultraskaņa, hidrodinamiskā berze. Kavitācijas pūslītis

  34. Šūnu dezintegrēšana • Mehāniskās metodes - saberzšana, samalšana, saspiešana, ultraskaņa, hidrodinamiskā berze. French press

  35. Šūnu dezintegrēšana • Ķīmiskās metodes - lizēšana ar denaturējošu vielu palîdzību (sārmi, virsmas aktīvās vielas) • Fermentatīvās metodes - hidrolītisko fermentu izmantošana - lizocīms, proteāzes, celulāzes

  36. VĪRUSU IEGŪŠANA un ATTĪRĪŠANA Šūnu ekstraktu frakcionēšana un koncentrēšana Filtrēšana (filtrējošies vīrusi) Šamberlēna pudele – keramikas filtrs

  37. VĪRUSU IEGŪŠANA un ATTĪRĪŠANA Šūnu ekstraktu frakcionēšana un koncentrēšana Filtrēšana

  38. VĪRUSU IEGŪŠANA un ATTĪRĪŠANA Šūnu ekstraktu frakcionēšana un koncentrēšana Filtrēšana

  39. VĪRUSU IEGŪŠANA un ATTĪRĪŠANA Šūnu ekstraktu frakcionēšana un koncentrēšana Filtrēšana - membrānu filtri 0,45/0,22 mm

  40. Šūnu ekstraktu frakcionēšana un koncentrēšana Filtrēšana: Amicon ultrafiltri molekulu sadalīšanai pēc masas

  41. Šūnu ekstraktu frakcionēšana un koncentrēšana Precipitācija Daļiņu hidratācijas apvalka noārdīšana, NaCl, CH3CHO2Na, LiCl. (NH4)2SO4

  42. Šūnu ekstraktu frakcionēšana un koncentrēšana Centrifugēšana Relatīvais centrifugēšanas spēks:

  43. Šūnu ekstraktu frakcionēšana un koncentrēšana Centrifugēšana Sedimentācijas koeficientu (s) mēra svedbergos (S) 1S = 10-13 s Molekula ar sedimentācijas koeficientu 10 S (10×10−13 s) pārvietosies 1 mm/s (1x10-6 m) pie 100 K g (106 m/s2) Sedimentācijas koeficients Teodors Svedbergs (1884.-1971.) Ultracentrifūga, NP -1926.

  44. Vīrusu (plazmīdu) attīrīšana Centrifugēšana gradientā Ultracentrifūgas Beckman Optima 1000 100 K rpm, 800 K g Beckman Spinco L5-65 65 K rpm, 400 K g

  45. Vīrusu (plazmīdu) attīrīšana Centrifugēšana gradientā Ultracentrifūgas

  46. Šūnu ekstraktu frakcionēšana un koncentrēšana Centrifugēšana

  47. Vīrusu (plazmīdu) attīrīšana Centrifugēšana gradientā Rotoru tipi Piekaru rotors SW 55 Ti 55; K rpm; 368 K x g Vertikālais rotors VTi-50; 50 K rpm; 242 K x g

  48. Vīrusu (plazmīdu) attīrīšana Centrifugēšana gradientā Gradienta veidi Kāpņveida gradienta iegūšana

  49. Vīrusu (plazmīdu) attīrīšana Centrifugēšana gradientā Gradienta veidi Nepārtrauktā gradienta iegūšana

More Related