المقدمة

1. دراسة تأثير حليب الابل في نمو طفيلي اللشمانياالاحشائيةLeishmaniadonovaniداخل الجسم الحي In vivo من قبل الباحتين مصطفى جواد الغزي بسعاد عقرب العبودي صادق ثاجبالغزي

2. بسم الله الرحمن الرحيم أَفَلَا يَنظُرُونَ إِلَى الْإِبِلِ كَيْفَ خُلِقَتْصدق الله العلي العظيم (الغاشية /۱۷)

3. المقدمة

4. المقدمة داء اللشمانياLeishmaniesis) ) هو من الامراض الطفيلية التي يسببها طفيلي اللشمانياLeishmania والذي ينتقل عن طريق عضة ذبابة الرمل (Sand fly ) وهو من الامراض المتوطنة في العراق (Al-Hamash 2012 :Saporito, et al, 2013). تتوزع الاصابه بداء اللشمانيا على 98 دولة ويتراوح عدد الاشخاص المصابين بهذا المرض حوالي 12 مليون شخص بينما تقدر معدلات الإصابة 2 مليون اصابه جديدة سنويا حيث ان 75%من الحالات تمثل داء اللشمانيا الجلدية و 25% تمثل داء اللشمانياالاحشائية (Alvar et al, 2012). يكون مرض الليشمانيا ذو أعراض سريرية كثيرة تبعا للحالة المناعية للمضيف ولنوع الطفيلي ( أحشائي أو جلدي ) فالليشمانياالاحشائية لها علامتان مميزتان هما الارتفاع بدرجات الحرارة ونقص الوزن ومن ثم تضخم الكبد والطحال يصاحب ذلك فقر دم ونقص بكريات الدم البيض والصفيحات الدموية (2006,.Duprey et al) .

5. المقدمة • يعد داء اللشمانياLieshmaniasisمن الامراض الذي له مشكلة صحية مهمة في جميع انحاء العالم, يستوطن هذا الداء في المناطق الاستوائية وشبه الاستوائية والبلدان المطلة على البحر الابيض المتوسط , يؤثر على12 مليون شخص وهناك ما مجموعه350 مليون شخص في 98دولة مهدد في خطر الاصابة بداء اللشمانيا (WHO, 2004) . • لطفيلي اللشمانيا طوران الاول هو الطورامامي السوط Promistigoteوهو الطور المصيب يتطفل داخل الحشرة الناقلة والثاني هوعديم السوط Amistigoteيتطفل داخل الخلايا البلعميةالكبيرة macrophage في الانسان واللبائنالاخرى(Jeronimo, 2004). • ينتقل المرض بواسطة انثى ذبابة الرمل او الفاصدة sand fly التي تنتمي الى جنس ال Phlebtomusفي العالم القديم والى جنس Lutozomyaفي العالم الجديد (Jeronimo, 2004).هناك ثلاثة انواع من ذبابة الرمل التي تقترح كنواقل للمرض وهي . Phelobatomusalexandri و P . papitasi و P. sergenti( حبيب, 2006)

6. المقدمة تسبب اللشمانياالاحشائيةLeishmaniadonovani مرض الحمى السوداء او ما يسمى الكلاآزار وهو المرض الاكثر حدة من داء اللشمانيات الاخرى تظهراعراض الاصابة بعد (8-2 )اشهر. يسبب هذا الداء اثرًاً على الاعضاء الداخلية مثل الكبد والطحال ونخاع العظم (Clem, 2010) . من الأعراض المرضية ((Clinical Symptoms للإصابة باللشمانياالاحشائية في الإنسان والحيوانات الأخرى هي الارتفاع التدريجي أو الفجائـي للحمى منتظمة أو غير منتظمة و فقدان الوزن وهزال وضعف مستمر يرجع إلى خلل في الأمعاء مع حدوث الإسهال وتقيؤ في بعض الحالات (Sciaramellaet al.,1997) وعلى هذا الاساس تبدي منظمة الصحة العالمية اهمية لهذا المرض كواحد من الامراض الطفيلية الخمسة (السل والتيفوئيد والسحايا والملاريا والكالاآزار) التي تعمل على مكافحتها والقضاء عليها (.AL –Jebouri, 2002) .

7. حليب الابل يمتلك حليب الناقة مركبات ذات طبيعة بروتينية ومضادات التخثر، ومضادات التسمم ومضادات الجراثيم وهي تمتلك خصائص مقاومة للجراثيم وخلال مدة محددة من الزمن تعرقل هذه الاجسام تكاثر الاحياء الدقيقة في حليب الناقة، ولهذا فهو لا يتجبن الامر الذي يميزه عن حليب بقية الحيوانات الزراعية من حيث امكانية حفظه لمدة طويلة في حالته الطازجة ٬ويعد حليب الابل ذا خصائص فريدة من ناحية التركيب الكيميائي مما يؤهله ليستخدم حليبا للاطفال لفوائده الجمة(Zagorskiet al .,1998). يختلف حليب الابل عن حليب المجترات الاخرى بأنه يحتوي مستوى منخفض من الكوليسترول ومستوى منخفض من السكر بينما يكون غنياً بالمعادن (الصوديوم ، البوتاسيوم ، الحديد ، النحاس ، الخارصين ، المغنيسيوم). ويكون حليب الابل غنياً بفيتامين(A،B2،C،E) ويمتلك مستوى منخفض من البروتين ويكون ذو تراكيز عالية من الانسولين(Zagorskiet al .,1998)

8. اهداف الدراسة

9. أهداف الدراسة ان السيطرة على داء اللشمانيا يواجه عدة عقبات اهمها عدم وجود لقاح فعال وامن حتى الان فضلا عن الادوية المتوفرة التي تكون اما غير فعالة تماما واما ذات تأثيرات جانبية وخصوصا في الاطفال او تكون ذات كلفة عالية فضلا عن ظهور سلالات جديده من هذا الطفيلي ايضا تكاد تكون مقاومه للعلاجات المتاحة. لذا تهدف الدراسة الحالية الى تقييم فعالية حليب الابل في ونمو طفيلي الشمانياالاحشائية داخل الجسم الحي وكذلك دراسة الاستجابة المناعية الخلوية المتمثلة باختبار فرط الحساسية المتاخرDelayed Type of Hypersensitivity (DTH).

10. المواد و طرائق العمل

11. المواد 1- مصدر عزلة اللشمانيا تم الحصول على عزلة نقيه ومشخصه من طفيلي الليشمانياالحشويةLeishmaniadonovaniمن قسم علوم الحياة \كلية العلوم \جامعة البصرة . 2- مصدر حليب الابل تم الحصول على الحليب من قطيع ابل يعود لأحد المربين في منطقة سيد دخيل شرق مدينة الناصرية / ذي قار بحدود 25 كم ، إذ جمعت عينات الحليب من الابل التي بعمر 4-9 سنة. تم الحصول على عينات الحليب بطريقة الحلب اليدوي Hand Milking وجمعت العينات في حاويات معقمة مسبقا ٬ وتم نقل الحليب مباشرة بوساطة ثلاجة مبردة الى المختبر ٬وحفظا بعدها في الثلاجة تحت درجة حرارة 2-5 م° الى حين الاستعمال . 3- الحيوانات المختبرية أجريت التجارب على ذكور الفئران البيض المختبرية Mus muscles من سلالة Balb/c وبعمر شهرين تقريبا التي تم الحصول عليها وتربيتها في البيت الحيواني \ قسم علوم الحياة \ كليه العلوم \جامعة ذي قار ، اذ وضعت الفئران في أقفاص بلاستيكية ولكل قفص غطاء معدني مشبك مزود بقنينة للماء ومكان لوضع الغذاء، وفرشت أرضية الأقفاص بنشارة الخشب التي كانت تبدل كل اسبوع للمحافظة على نظافة الفئران، واستعملت العليقة المركزة عالية البروتين في تغذية الفئران المختبرية.

12. طرق العمل 1- تاثيرحليب وادرار الابل في نمو الطفيلي داخل جسم الكائن الحي • تم تقسيم الحيوانات الى 4 مجاميع كل مجموعة تتكون من 10حيوانات وتم حقن 3 مجاميع بالشكل المسوط للطفيلي وبجرعة 1.2×610 طفيلي \ 0.2 ملليتر وفي اليوم التالي تم معاملة الحيوانات المخمجة كالاتي :- • 1- المجموعة الاولى جرعت 0.2 ملليتر يوميا بحليب الابل لمدة اسبوع . • 2- المجموعة الثانية جرعت 0.2 ملليتر يوميا بحليب الابل لمدة اسبوعين . • 3- المجموعة الثالثة (سيطرة موجبة) جرعت 0.2 ملليتر يوميا بمحلول الملحي الفسيولوجي • 4- المجموعة الرابعة (سيطرة سالبة ) جرعت 0.2 ملليتر يوميا بمحلول الملحي الفسيولوجي . • ومن ثم قسمت كل مجموعة الى مجموعتين اعتمادا على مدة الخمج (45 , 90) يوم كل مجموعه تضم 5 حيوانات.

14. 2- تشريح الحيوانات تم تخدير الحيوان المراد تشريحه في قنينة محكمة الغلق حاوية على قطن مشبع بمادة مخدرة الكلوروفورم Chloroform لمدة ثلاث دقائق ومن ثم اخذ وزن الحيوان، تم ثبت الحيوان في صحن التشريح وعقمت منطقة الصدر والبطن بالكحول الاثيلي (70%)، ثم فتح الجلد بعدها العضلات وبعدها تم سحب الدم من منطقة القلب للحيوان المخدر لغرض اجراء فحوصات الدم والزرع . استأصل الطحال والكبد وتم قياس طول الطحال ووزن كل منهما وقسم كل منهما الى قطع صغيرة عمل منها طبعات Impression على شرائح زجاجية slides وتصبيغهابصبغه كيمزا والقطع الاخرى تم زرعها في الاوساط الزرعية الخاصة بالطفيلي.

15. 3- تقييم فعالية حليب الابل في خمجية طفيلي اللشمانياالاحشائية • لغرض تقييم فعالية حليب والابل في خمجية الطفيلي تم استخدام المعايير الاتية لمقارنة تقدم الخمج في الحيوانات المخمجة بالطفيليات والمجرعة بحليب الابل ولفترات مختلفة. • 1- التغييرات الحاصلة في معدل الفرق في سمك وسادة القدم Foot bad حقن كل حيوان بجرعة 0,2 مل (5×610 طفيلي) في راحة القدم الخلفية وحقنت راحة القدم الاخرى (فينول - سلاين) فقط بالحجم نفسه وعدت كسيطرة .وبعد 48 ساعة من الحقن سجل مقدار التضخم الحاصل في راحه كلا القدمين والفرق بين القرائتين تمثل الاستجابة المناعية. • 2- نسبة تضخم الطحال =وزن الطحال (ملغم)\وزن الجسم (غم) ((Stauber, 1953 • 3-الزيادة الحاصلة في طول الطحال (Stauber ,1966). • 4-الزيادة الحاصلة في معدل وزن الكبد (Stauber ,1966). • 5-ظهور الشكل المسوط في مزارع الكبد والطحال والدم (schnuret al.,1973 ; Stauber ,1966 ) • 4- التحليل الاحصائي • اجري باستخدام اختباردنكن المتعدد المدىDuncan Multiple Range Test لتشخيص جميع الفروقات الممكنة بين جميع معدلات المعاملات وعند مستوى معنوية p˃0.05 باستخدام البرنامج الاحصائي الجاهز.( SPSS)

16. النتائج

17. 1- نتائج التغييرات الحاصلة في معدل وزن الكبد جدول (1) يبين التغيرات الحاصلة في معدلات اوزان الكبد في مجاميع الفئران المعاملة وقياسها مع مجاميع السيطرة الموجبة والسالبة الأرقام في الجدول تعبر عن قيم المتوسطات ل 5 مكررات ±الخطأ القياسي SE -المتوسطات التي تحمل حروفاً مختلفة لكل عامل تختلف معنوياً عند مستوى أحتمالية p<0.05). )

18. 2- نتائج التغييرات الحاصلة في طول الطحال بين الفئران المعاملة قياسا بفئران السيطرة الموجبة والسيطرة السالبة الأرقام في الجدول تعبر عن قيم المتوسطات ل 5 مكررات ±الخطأ القياسي SE -المتوسطات التي تحمل حروفاً مختلفة لكل عامل تختلف معنوياً عند مستوى أحتمالية p<0.05). )

19. 3- نتائج التغييرات الحاصلة في نسبة تضخم طحال بين الفئران المعاملة قياسا بفئران السيطرة الموجبة والسيطرة السالبة • الأرقام في الجدول تعبر عن قيم المتوسطات ل 5 مكررات ±الخطأ القياسي SE • -المتوسطات التي تحمل حروفاً مختلفة لكل عامل تختلف معنوياً عند مستوى أحتمالية)p<0.05).

20. 4- نتائج دراسة الاستجابة المناعية الخلوية Cellular immune response المتمثلة بأجراء اختبار فرط الحساسية المتأخر - الأرقام في الجدول تعبر عن قيم المتوسطات ل 5 مكررات ±الخطأ القياسي SE -المتوسطات التي تحمل حروفاً مختلفة لكل عامل تختلف معنوياً عند مستوى أحتمالية p<0.05).)

21. 5- نتائج فحص الطبعات impression والمسح smear ومزارع الطفيليات ط = الطبعات ز = الزرع م = المسحات

22. الاستنتاجاتوالتوصيات

23. الاستنتاجات اثبت نتائج الدراسة داخل جسم الكائن الحي ان لحليب الابل دوراً كبيراً في منع الاصابة باللشمانيا الاحشائية في المجاميع الحيوانية المخمجة والمعاملة حيث تسجل اختلافات معنوية في معايير تقييم الاصابة عن السيطرة السالبة التوصيات 1-استمرار البحوث والدراسات عن تأثير حليب الابل في طفيليات اخرى . 2.استخدام حليب الابل كمعدلات مناعية ضد الخمج باللشمانيا الاحشائية. 3. محاولة تنقية المركبات والبروتينات الفعالة في حليب الابل والتي لم يسمح الوقت وتوفر الاجهزة من عزلها وتجريبها على طوري اللشمانيا داخل وخارج الجسم الحي . 4. دراسة تاثير حليب الابل في بقية المعايير الكيميائية وخاصة الانزيمات في الفئران المختبرية .

24. شكراً لإصغائكم