1 / 12

Analýza mutace C282Y v genu pro hemochromatózu

Analýza mutace C282Y v genu pro hemochromatózu. PCR – mutace C282Y (hemochromatóza). MASTER MIX – na 1 vzorek 15,8 ul H 2 O 2,5 ul pufr 1,5 ul primer 1 (P1) 1,5 ul primer 2 (P2) 2,0 ul MgCl 2 0,5 ul dNTP 1,0 ul DNA 0,2 ul Taq polymer á za (přidat na ledu).

lotte
Download Presentation

Analýza mutace C282Y v genu pro hemochromatózu

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Analýza mutace C282Yv genu pro hemochromatózu

  2. PCR – mutace C282Y(hemochromatóza) • MASTER MIX – na 1 vzorek • 15,8 ul H2O • 2,5 ul pufr • 1,5 ul primer 1 (P1) • 1,5 ul primer 2 (P2) • 2,0 ul MgCl2 • 0,5 ul dNTP • 1,0 ul DNA • 0,2 ul Taq polymeráza (přidat na ledu)

  3. PCR – mutace C282Y - ELFO

  4. RFLP –polymorfizmus délky restrikčních fragmentů restrikční analýza DNA pomocí jejího štěpení restrikčními endonukleázami (RE) ve specifických restrikčních místech pokud sekvenční diference (polymorfizmus) vytváří nebo ruší specifické místo pro RE, vznikají po restrikci fragmenty odlišných velikostí

  5. RFLP –polymorfizmus délky restrikčních fragmentů restrikční analýza DNA pomocí jejího štěpení restrikčními endonukleázami (RE) ve specifických restrikčních místech pokud sekvenční diference (polymorfizmus) vytváří nebo ruší specifické místo pro RE, vznikají po restrikci fragmenty odlišných velikostí

  6. RFLP –polymorfizmus délky restrikčních fragmentů Restrikční endonukleázy (RE) • známo asi 2100 bakteriálních RE • RE rozpoznávají různě krátké sekvence nukleotidů (4,6,8),ve kterých pak štěpí kovalentní fosfodiesterové vazby Princip analýzy • výchozí DNA (genomická DNA, PCR produkt) • štěpení restrikčním enzymem na fragmenty různých velikostí • elektroforetická separace fragmentů

  7. Sekvence oblasti mutace C282Y Primerymísto GTAC štěpí restrikční endonukleáza RsaI místo mutace C282Y změna GTGC na GTAC

  8. RFLP – mutace C282Y • MASTER MIX – na 1 vzorek • 7,0 ul H2O • 2,0 ul pufr • 10 ul PCR produkt • 1,0 restrikční endonukleáza RsaI (přidat na ledu) • Inkubovat 37°C 2 hod

  9. RFLP – mutace C282Y - ELFO

  10. HEMOCHROMATÓZA • hereditární hemochromatóza - relativně časté dědičné onemocnění charakterizované vstřebáváním nadbytku železa, jeho ukládáním v orgánech a z toho pak rezultujícím poškozením organismu • hepatopatie, diabetes mellitus, arthropatie, impotence, amenorhea, kardiomyopatie, endokrinní poruchy • sérové železo, saturace transferinu, sérový ferritin, jaterní biopsie • venepunkční terapie, desferrioxamin

  11. Mutace HFE genu

More Related