1 / 24

NOVI PRISTUP ISTRAŽIVANJU PERIFERNOG ŽIVČANOG SUSTAVA

NOVI PRISTUP ISTRAŽIVANJU PERIFERNOG ŽIVČANOG SUSTAVA. dr. sc. Katarina Vukojević, dr. med. Zavod za anatomiju, histologiju i embriologiju, Sveučilište u Splitu, Medicinski fakultet 10. svibnja 2011. metode istraživanja. sakupljanje tkiva i određivanje starosti zametaka

malini
Download Presentation

NOVI PRISTUP ISTRAŽIVANJU PERIFERNOG ŽIVČANOG SUSTAVA

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. NOVI PRISTUP ISTRAŽIVANJU PERIFERNOG ŽIVČANOG SUSTAVA dr. sc. Katarina Vukojević, dr. med. Zavod za anatomiju, histologiju i embriologiju, Sveučilište u Splitu, Medicinski fakultet 10. svibnja 2011.

  2. metode istraživanja • sakupljanje tkiva i određivanje starosti zametaka • uklapanje tkiva u parafin i rezanje tkiva • imunohistokemijsko i imunofluorescentno bojanje rezova • kvantifikacijska analiza Phox2b, nestin, PGP 9.5, S100, GFAP, IB4 i NF200 +st.

  3. Poprečni presjek kroz formirajuću neuralnu cijev

  4. Postoje li nediferencirane st. NG? Razvojna sudbina st. neuralnog grebena (NG) u SG Molekularni biljezi NG Nestin i Phox2b Koje st. proliferiraju? Ki-67 Nestin Phox2b Ki-67 PGP9.5 S100 GFAP NF200 IB4 Kako i kada dolazi do restrikcije u razvojnoj sudbini st. NG? Kada se pojavljuju prve glija st.? Kada se prvi put pojavljuju neuroni? PGP9.5 Mehano- receptor? A α/β NF200 Glija st. S100 GFAP Nociceptor? A δ / CGRP+ C / IB4+

  5. Fenotipske karakteristike st. spinalnih ganglija (SG) se temelje na: • morfologiji- veličina-imunohistologija- TEM- mijelinizacija- somatotopska organizacija- modalitet • razvoju • elektrofiziologiji

  6. Poprečni presjek kroz SG ljudskog embrija starog 5 tj. Hematoksilin & eozin. Povećanje 20×, ljestvica 40μm

  7. Poprečni presjek kroz spinalni ganglij ljudskog zametka od 10 tjedana. Imunohistokemijsko bojanje na phox2b. Povećanje 100×, ljestvica 10μm.

  8. nestin DAPI Poprečni presjek kroz spinalni ganglij ljudskog zametka starosti 6 tjedana. Imunofluorescentno bojanje na nestin i DAPI. Povećanje 40×, ljestvica 20μm. merge merge

  9. nestin Ki-67 merge Poprečni presjek kroz SG ljudskog embrija starog 6 tj. Imunofluorescentno bojanje na nestin i Ki-67, x40 DAPI merge

  10. PGP9.5 Ki-67 merge Poprečni presjek kroz spinalni ganglij ljudskog zametka starosti 8 tjedana. Imunofluorescentno bojanje na PGP9.5 i Ki-67. Povećanje 40×, ljestvica 15μm.

  11. PGP9.5 nestin Poprečni presjek kroz spinalni ganglij ljudskog zametka starosti 10 tjedana. Imunofluorescentno bojanje na PGP9.5, nestin i DAPI. Povećanje 100×, ljestvica 35μm merge DAPI merge

  12. Poprečni presjek kroz spinalni ganglij ljudskog zametka starosti 5 tjedana. Imunofluorescentno bojanje na IB4. Povećanje 40×, ljestvica 20μm.

  13. Poprečni presjek kroz spinalni ganglij ljudskog zametka starosti 5 tjedana. Imunofluorescentno bojanje na NF200. Povećanje 40×, ljestvica 10μm.

  14. S100 Ki-67 merge Poprečni presjek kroz spinalni ganglij ljudskog zametka starosti 9 tjedana. Imunofluorescentno bojanje na S100 i Ki-67. Povećanje 40×, ljestvica 35μm.

  15. S100 nestin Poprečni presjek kroz spinalni ganglij ljudskog zametka starosti 10 tjedana. Imunofluorescentno bojanje na S100, nestin i DAPI. Povećanje 100×, ljestvica 20μm merge DAPI merge

  16. S100 GFAP Poprečni presjek kroz spinalni ganglij ljudskog zametka starosti 10 tjedana. Imunofluorescentno bojanje na GFAP, S100 i DAPI. Povećanje 100×, ljestvica 20μm. merge DAPI merge

  17. nestin GFAP Poprečni presjek kroz spinalni ganglij ljudskog zametka starosti 8 tjedana. Imunofluorescentno bojanje na GFAP, nestin i DAPI. Povećanje 100×, ljestvica 25μm. merge DAPI merge

  18. Razvojna sudbina stanica neuralnog grebena u spinalnim ganglijima Progenitorne stanice (nestin+, phox2b+ i nestin+Ki-67+) ? Stanice prethodnice potpornih stanica (nestin+S100+, S100+Ki-67+, nestin+GFAP+) Stanice prethodnice neurona (?) ? ? Diferencirani neuroni (PGP9.5+, PGP9.5+nestin-, PGP9.5+Ki-67-) Diferencirane potporne stanice (GFAP+, S100+, GFAP+S100+) mehanoreceptori (NF200+, NF200+Ki-67-) nociceptori (IB4+, IB4+Ki-67-)

  19. Za Ki-67 bjelančevinu je točno sve OSIM: a. izvrstan je biljeg proliferacije b. stanice pozitivne na ovu bjelančevinu imaju pozitivan signal u jezgri c. prisutna je u svim aktivnim fazama staničnog ciklusa d. koristi se i u dijagnostičke svrhe e. koristi se isključivo u znanstvenim istraživanjima

  20. Za imunofluorescencijsku metodu je točno slijedeće: a. primarno protutijelo se vizualizira sekundarnim fluorescentnim protutijelom b. moguće je detektirati koekspresiju dviju bjelančevina u istoj stanici c. Texas Red se koristi kao sekundarno protutijelo d. metoda je osjetljivija u odnosu na imunohistokemijsku metodu e. sve navedeno je točno

  21. Hvala na pozornosti E-mail: katarina.vukojevic@mefst.hr

More Related