200 likes | 708 Views
Isolasi Papain dan Karakterisasi Biokimia. Michelle 10509016 Surya 10509002 Gaby Almira 10509028. Enzim Papain. Enzim papain merupakan enzim proteolitik yang dihasilkan dari isolasi penyadapan getah buah pepaya ( Carica papaya, L.). Kegunaan dari papain :
E N D
Isolasi Papain dan Karakterisasi Biokimia Michelle 10509016 Surya 10509002 Gaby Almira 10509028
Enzim Papain • Enzim papain merupakan enzim proteolitik yang dihasilkan dari isolasi penyadapan getah buah pepaya (Carica papaya, L.) • Kegunaan dari papain: • Dalam industri makanan dan minuman : • pelunak daging • stabilizer dalam pembuatan jelly • pengental dalam pembuatan sirup sari buah • penggumpal susu dalam pembuatan keju • Dalam bidang farmasi: • pelancar pencernaan • luka infeksi • mengurangi penggumpalan darah sebelum operasi
Tujuan • Menentukan nilai Vmaks dan Km dari enzim papain • Menentukan aktivitas enzim papain
Pepaya Getah pepaya mengandung tiga jenis enzim, yaitu enzim papain, kimopapain dan lisozim. • Keistimewaan enzim papain • Mempunyai kestabilan yang baik pada larutan yang mempunyai pH 5.0 • Memiliki keaktifan daya tahan panas yang lebih tinggi dari enzim lain • Tidak bersifat toksik • Tak ada reaksi samping • Dapat bekerja dengan baik pada konsentrasi rendah
Alat dan Bahan • Alat : Bahan : • Gelas kimia - Buah pepaya muda • Tabung reaksi - Akuades • Inkubator 500C - Aseton • Batang pengaduk/vortex - Bufer fosfat 0,1pH 7,0 • Spektrofotometer - Kasein 2% • Stopwatch - L-sistein 0,1 M • Freezdryer - Asam trikloro asetat - Standar Tirosin 1 mg/mL
Pengujian aktivitas enzim papain (Metode Murachi) • Inkubasi t = 20 menit
Metode murachi • Inkubasi t = 0 menit
Data Pengamatan • Absorbansi Larutan Sampel • Absorbansi Larutan Standar Tirosin
Pengolahan Data Kurva Standar tirosin dari persamaan garis y = 0,0046 x + 0,0755 substitusi absorbansi maka diperoleh
Pengolahan Data( Penentuan Aktivitas Papain) • Unit aktivitas protease = • m Tirosin = 53,80434783 161,4130435 • Unit aktivitas protease= =16,14130435
Penentuan Vmaks dan Km [Tirosin] = [Tirosin]sampel - [Tirosin]kontrol
Penentuan Nilai KM dan Vmax Berdasarkan Kurva Lineweaver-Burk [ kasein ]
Nilai Vmaks dan Km • Dari kurva diperoleh persamaan garis y = 199,42x + 0,0277. Berdasarkan persamaan Lineweaver-Burk; • Maka dapat ditentukan V max dan KM sebagai berikut:
Pembahasan Fungsi reagen • Kasein : substrat • L-sistein : aktivator • Buffer posfat : menjaga pH optimal • TCA : menghentikan aktivitas enzim Inkubasi T= 0 -> blanko T= 20 -> sampel