1 / 9

ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים ללמוד מצב האוליגומריזציה של NhaA בממברנה

ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים ללמוד מצב האוליגומריזציה של NhaA בממברנה. רוני חזן דניאל שנפלד. 254. ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים. 388. 319. 245. 152. 205. 225. 178. 288. 119. 352. ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים. החלבון המטופל הוא NhaA-cys-less-V254C-AXH.

micah
Download Presentation

ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים ללמוד מצב האוליגומריזציה של NhaA בממברנה

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים ללמוד מצב האוליגומריזציה של NhaA בממברנה רוני חזן דניאל שנפלד

  2. 254 ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים 388 319 245 152 205 225 178 288 119 352

  3. ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים החלבון המטופל הוא NhaA-cys-less-V254C-AXH מרקר ללא טיפול o-PDM p-PDM BMH kDa 62 דימר 47.5 32.5 מונומר 25

  4. תוצאות ניסוי 1 • ללא טיפול רוב החלבון נשאר במצב מונומרי אולם יש כמות משמעותית הנמצאת כדימר • בשימוש במגשר מס' 2 pPDM (מגשר במרחק של כÅ10) קיבלנו העברה מירבית לצורת הדימר • גם המגשר o-PDM (מגשר כÅ6) נתן דימריזציה גבוהה • המגשר BMH ארוך יותר (Å16), אך גמיש • תוצאות אלה מראות שהמרחק בין שתי היחידות של הדימר הינו בטווח של Å10

  5. 254 ניסוי 2 - גילוי שיירים חשופים למדיום 388 319 245 152 205 225 178 288 119 352

  6. ניסוי 2 - גילוי שיירים חשופים למדיום coomassie UV 225 NEM 254NEM 225 NEM 254NEM מרקר 254 225 254 225 הcoomassie ששימש לביקורת מראה שבכל הבאריות כמות זהה פחות או יותר של חלבון

  7. תוצאות ניסוי 2 • מוטנט V254C הפונה לציטופלסמה נשאר מסומן לפני ואחרי הטיפול בNEM כלומר הוא לא נקשר ע"י MTSET בתא השלם • במוטנט H225C הפונה לפריפלזמה חל ירידה בסימון לאחר הטיפול עם NEM כלומר הוא היה חשוף למדיום כשהתא היה שלם • ניתן להסיק מכך שהלולאה המכילה את עמדה 225 פונה לציטופלזמה

  8. ניסוי 3 – מדידת פעילות החלבון המוטנטי V254C לאחר טיפול במגשר p-PDM

  9. מוטנט V254C שלא עבר טיפול עם מגשר מראה גרף פעילות התלוי בpH – פעילותו עולה כאשר הpH עולה. • טיפול במגשר גורם להסטה של פרופיל הפעילות כתלות בpH – גם בpH נמוך הפעילות עדיין גבוהה יחסית • ייתכן והדבר נובע מהקישור הקשיח של המגשר המגביל את שינויי הקונפורמציה שהלולאה יכולה לעבור

More Related