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Por Donde Empezar !!. Situaciones. Caza ilegal: caza, pesca Adulteración de especies o fraude de alimentos Especies en peligro: el tráfico ilegal Casos forenses: el abuso, el robo, la evidencia encontrada en la escena "humano " del delito
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Situaciones • Caza ilegal: caza, pesca • Adulteración de especies o fraude de alimentos • Especies en peligro: el tráfico ilegal • Casos forenses: el abuso, el robo, la evidencia encontrada en la escena "humano " del delito • Brotes de enfermedades, las zoonosis (tuberculosis, la EEB, etc) • No hay datos morfológicos disponibles
Los métodos disponibles • Electroforesis de proteínas • El calor desnaturaliza en los alimentos procesados • ADN, basados en la PCR • ¿ Específicoso universalesespecies? • ¿Qué métodos utilizar? • ¿ En tiempo real PCR, RFLP, secuenciación, otros? • Hueso, marfil, plumas, materia fecal, sangre • ¿ Muestras difíciles necesitan técnicas diferentes?
¿Qué marcadores se utilizan? • ¿ Microsatélites? ¿Las diferentes especies? • ¿ Los pros y los contras? • ADNmt • D-loop, 12S, 16S • Citocromo B, gen COI (citocromo c oxidasa) • ¿ Los pros y los contras? • ¿ Marcadores universal? ¿ Bases de datos? • ¿ Los pros y los contras?
CitB vs CO1 • Tobe et al, Genética FSI • Las pruebas fueron primero una adaptación de los estudios filogenéticos (citb) • Universal de los cebos, la secuencia; pero no hay directrices en cuanto a lo que la variación porcentual fue; exclusión o inclusión • Código de barras del ADN (CO1) en 2003, para la identificación y taxonomía • Secuenciación, los cebadores universales, base de datos disponible en línea, a continuación, comparar con secuencia de referencia
Estudio echo porTobe • En comparación con 236 diferentes mamíferos, pedidos 29 con ambos marcadores • Found size of each gene to be variable between species but invariable w/in same species • Tamaño encontrados de cada gen es variable entre las especies, pero invariable en una misma especie • Citocromo B (1149 bases) 22,4% (257 pb) se conserva en todas las muestras • CO1 (1557bp) 43.7% (680 bases) se conservaron • Entre especieusandohumanos, vaca, y perro • 82%,97& , 98% homólogo (citb) • 88%, 97% and 98% en CO1 • Fue concluido que citocromo b trabajó mejor en los fragmentos pequeños (degradados) y en variación dentro de las especies
Uso presunto de ID de ADN mitocondrial • Citocromo B universal; cebador adelante y atrás que son específicos de especie • Animales domésticos • Multiplexado
Un método rápido y simple para la identificación de las especies de carne y productos cárnicos mediante PCR • Linea 1 – KB Ladder • Linea 2 – Cabra • Linea 3 – Cabra • Linea 4 – Pollo • Linea 5 – Pollo • Linea 6 – Equino • Linea 7 – Equino • Linea 8 – Bovino • Linea 9 – Bovino • Linea 10 – PCR - control 1 23 4 5 6 7 8 9 10 Ciencia carne, Volumen 51, Número 2, febrero de 1999, páginas 143-148T. Matsunaga, K. Chikuni, R. Tanabe, S. Muroya, K. Shibata, J. y Y. YamadaShinmura