WYODRĘBNIANIE DNA KIWI I BANANA

1. WYODRĘBNIANIE DNA KIWI I BANANA Opracowała: Lucyna Kołodziej klasa I c

2. Jak wyodrębnić DNA z kiwi ? Co potrzeba: • Kiwi • 5g płynu do mycia naczyń lub mydło • 2g soli • 100ml wody pitnej • 100ml lodowatego alkoholu • 3 słoiki • Nóż • Czajnik

4. Jak dalej postępujemy 1. Obieramy owoc kiwi i tniemy go na małe kawałki. 2. Wkładamy kawałki do słoika i jak najdokładniej rozgniatamy kiwi. Służy to rozbiciu części komórek i stworzeniu dużej powierzchni, z której będzie można ekstraktować DNA. 3. Łączymy ze sobą mydło, sól i wodę, wolno mieszając, dopóki sól się nie rozpuści. Nie mieszamy zbyt szybko, ponieważ powstanie mnóstwo bąbelków! Ta mieszanina nazywana jest też buforem ekstrakcyjnym. 4. Dodajemy bufor do rozgniecionego owocu kiwi i jeszcze kilka razy rozgniatamy całość. Im dokładniej wszystko rozgnieciemy, tym więcej DNA będzie się dało wyekstraktować.

8. 5. Umieszczamy mieszankę kiwi i buforu ekstrakcyjnego w temperaturze 60°C na 15 minut. Funkcję inkubatora spełni duża miska napełniona do połowy wysokości wrzącą wodą z czajnika. Ostrożnie wkładamy słoik z kiwi do inkubatora i pozostawiamy całość na 15 minut. Inkubacja powoduje dalszy rozpad komórek i uruchamia proces rozkładu niektórych komórek białkowych. 6. Wyciągamy słoik z inkubatora i filtrujemy rozgniecioną masę do innego słoika przez drobne sito lub filtr do kawy. Pozwoli to usunąć niepotrzebne kawałki owocu. Powinniśmy otrzymać zielony płyn, który zawiera DNA owocu kiwi. 7. Wolno wlewamy zmrożony alkohol po ściance słoika. Alkohol odznacza się mniejszą gęstością, dlatego utworzy przezroczystą warstewkę na górze mieszaniny. 8. W miejscu, gdzie warstewka zimnego alkoholu styka się mieszaniną, pojawi się biała galeretowata substancja – jest to DNA. Możemy ją wyciągnąć za pomocą haczyka zrobionego ze spinacza do papieru.

12. Jak to się dzieje ? Wyekstraktowane DNA pochodzi z miliardów rozgniecionych komórek owocu kiwi – dlatego tak łatwo jest je zobaczyć. Sól sprawia, że łańcuchy DNA przyklejają się do siebie. DNA nie rozpuszcza się w alkoholu, dlatego krzepnie w formie galeretowatej substancji, którą można wyjąć.

14. DNA banana Za pomocą kilku prostych substancji chemicznych gospodarstwa domowego i niektórych elementów wspólnych z kuchni lub laboratorium, stosunkowo łatwo wyodrębnić DNA z materiału biologicznego, np. banana. Banany są dobrymi owocami dla ekstrakcji DNA, ponieważ są one miękkie i łatwe do zacieru. Technika ekstrakcji jest bardzo prosta.

15. Instrukcja 1.Obieramy banany i kroimy je na małe kawałki. 2.Umieszczamy kawałki bananów w słoiku i wlewamy wodę. Dodajemy łyżeczkę soli do mieszaniny. Mieszamy mieszaninę, aż zrobi się gęsty płyn. 3. Wlewamy mieszaninę przez sitko do słoika szklanego. Napełniamy słoik w połowie drogi. 4.Dodajemy 2 łyżeczki płynnego mydła do bananowej miazgi w szklanym słoju. Mieszamy mieszaninę bardzo delikatnie. Mydło pomaga rozbić ściany komórkowe i błony, uwalniając DNA i inne zawartości komórek w roztworze. Ważne jest, aby wymieszać delikatnie, aby uniknąć tworzenia się pęcherzyków, które mogą zakłócać ekstrakcję.

16. 5.Wlewamy bardzo zimny alkohol powoli z boku słoika do mieszaniny (można umieścić alkohol w lodówce na około 30 minut wcześniej). Należy to zrobić delikatnie. Alkohol jest lżejszy od mieszaniny bananów i powinien stanowić odrębną warstwę na wierzchu mieszanki. 6.Pozostawiamy mieszaninę spokojnie przez 5 lub 10 minut. 7.Alkohol z poprzedniego etapu będzie wyodrębniać część DNA z miliardów komórek bananów w mieszaninie. Wykałaczką lub spinaczem delikatnie podnosimy długie, nitkowate nici DNA. Nie są to pojedyncze cząsteczki, ale połączone z miliardów cząsteczek DNA wydobytych z komórek banana .