ADN fetal en sangre materna

1. II Curso-Taller Nacional de Medicina y Terapia Materno-Fetales Hospital “Ramón González Coro”, Febrero 2006. ADN fetal en sangre materna Dr. Davide Casagrandi Casanova davide@infomed.sld.cu www.scog.sld.cu www.gonzalezcoro.sld.cu

2. Retos del diagnóstico prenatal Reducir riesgos de complicaciones en la gestante. Diagnóstico en etapas tempranas del embarazo. • Diagnóstico prenatal no invasivo: • Células fetales en sangre materna. • Células fetales en cérvix uterino. • ADN fetal libre en sangre materna.

3. ADN fetal libre en sangre materna Fuente alternativa de estudio del material genético fetal sin la necesidad de procederes invasivos Estudio de afecciones obstétricas Diagnóstico prenatal

4. En 1997 se identificó por primera vez la presencia de la secuencia SRY en sangre de gestantes con feto masculino. • Lo et al., The Lancet, 1997. • Entre el 4% y 6% del ADN fetal libre en la sangre materna es de origen fetal. • El análisis del ADN fetal sólo es posible cuando la secuencia a estudiar está presente en el feto pero ausente en la madre.

5. Sangre materna (plasma, suero) Aislamiento del ADN libre P.C.R.

6. PCR de tiempo real (RT-PCR). • Estudios recientes emplean la RT-PCR para el estudio de las secuencias de ADN. • Permite además la cuantificación del ADN estudiado. Manuelpillai, Endocrinol, 2001. Vandesompele, Genome, 2002. Jones, Mol Hum Rep., 2002. Casagrandi, Mol Hum Rep., 2003. Muttukrishna, Mol Hum Rep., 2005.

7. Se ha detectado ADN fetal a partir de la 5ta. semana. Honda et al., Cancer, 2001. La concentración se incrementa con el tiempo de gestación. Lo et al, Am J Hum Genet, 1998, 1999. El ADN fetal no es detectable minutos después del parto. Lo et al, Am J Hum Genet, 1998. Lo et al, Am J Hum Genet, 1998, 1999.

8. Determinación del sexo fetal por estudio de ADN fetal libre en sangre materna • La mayoría de los protocolos estudian la secuencia SRY: la positividad de la prueba indica el origen fetal del ADN estudiado. • Indicado fundamentalmente en gestantes con riesgo de transmitir afecciones monogénicas con patrón recesivo ligado al cromosoma X. • Distrofia Muscular de Duchenne. • Hemofilia. • Hiperplasia adrenal congénita. • La determinación precoz del sexo permite ofrecer la interrupción de la gestación en el primer trimestre en casos de sexo masculino.

9. Determinación del sexo fetal por estudio de ADN fetal libre en sangre materna (II) • Procedimiento invasivo innecesario en casos de sexo femenino. • Hiperplasia adrenal congénita: se evita la administración innecesaria de esteroides a los fetos masculinos. Rijnders et al., Obstet Ginecol, 2001

10. Detección de defectos monogénicos en el ADN fetal libre. • Una vez aislado el ADN libre, es posible estudiar cualquier secuencia presente en el feto pero ausente en la madre. • Mutaciones estudiadas: • Distrofia miotónica(Amicucci et al., Clin Chem, 2000) • Acondroplasia(Saito et al., Tha Lancet, 2000) • Fibrosis quística(González-González et al., Prenat Diagn, 2002) • Enf. de Huntington(González-González et al., Prenat Diagn, 2003)

11. ADN fetal y genotipo Rh • Se ha identificado el genotipo Rh fetal a partir de las 16 semanas de gestación. Zhong et al., BJOG, 2000. • En casos de fetos Rh- se evitaría la administración innecesaria de anti-D durante la gestación. • El diagnóstico del genotipo fetal mediante el estudio del ADN se ha convertido en una práctica frecuente en en varios centros.

12. ADN fetal y complicaciones obstétricas • Diferentes estudios han demostrado concentraciones elevadas de ADN fetal libre en algunas afecciones: • Preeclampsia-Eclampsia. • Parto pretérmino • Restricción del crecimiento fetal • Aneuploidías fetales Interfase feto-placentaria anormal

13. ADN fetal libre y aneuploidías fetales. • La concentración de ADN fetal es tres veces superior en gestantes con fetos con trisomía 21. Lo et al, Clin Chem, 1999. • Elevado en casos de trisomía 13 y 21, pero no trisomía 18. Wataganara et al, Hum Genet, 2003. • ADN fetal como marcador de aneuploidía: Tasa de detección: 21%. Farina et al., Clin Chem, 2003. • Añadir la determinación de ADN fetal a otros marcadores (AFP, E3, hCG, Inhibina) elevaría la tasa de detección a mas del 85%. Rijnders et al., 2003.

14. ADN fetal libre y pre-eclampsia • La concentración de ADN fetal en estas gestantes es hasta 5 veces mayor. • Posibles causas: • Placentación anormal. • Disfunción renal (Tai-Wah et al., Clin Chem, 2002.) • ADN total está también aumentado en estas gestantes. • ADN total: puede ser estudiado en todas las gestantes independientemente del sexo fetal. Farina et al., Prenat Diagn, 2004.

15. ADN fetal libre y preeclampsia • Se han encontrado concentraciones elevadas en gestantes asintomáticas que posteriormente desarrollaron preeclampsia. Zhong et al., Hypertens Pregnancy, 2002. Farina et al., Prenat Diagn, 2004. Cooter et al., Am J Obstet Gynecol, 2004. • La concentración elevada de ADN fetal libre puede ser considerada un predictor de PE. • Elevado también en casos de Síndrome de HELLP. Swinkels et al., Clin Chem, 2002.

16. ADN fetal libre y parto pretérmino. • La determinación del ADN fetal pudiera ayudar a diferenciar el “falso” parto pretérmino del “verdadero”. Leung et al, Lancet, 1998. • Se ha sugerido su determinación como marcador de parto pretérmino en gestantes de riesgo. Wataganara et al., Hum Genet, 2003.

17. Concentración de ADN fetal y algunas complicaciones obstétricas. • 255 pacientes estudiadas. • Casos: 70, Controles: 185 • Concentración de SRY mediante RT-PCR (ge/ml) Casos Controles p__ Aborto 11,6 0 ‹ 0,05 P.Pretérmino 44,6 15,9 ‹ 0,01 P.E. 173,2 22,4 ‹ 0,05 D.P.P.N.I. 266,8 4,9 ‹ 0,05 Placenta Previa 167,7 37,0 ‹ 0,01 Wataganara et al., Hum Genet, 2003.

18. ADN fetal libre en sangre materna:conclusiones. • Su aislamiento y estudio ofrecen la posibilidad de estudiar el material genético fetal sin la necesidad de procedimientos invasivos. • Muchas mutaciones del ADN fetal pueden ser estudiadas por esta vía. • Su estudio contribuye a esclarecer aspectos de la fisiopatología de afecciones obstétricas y su predicción.

19. Parto pretérmino D.M.D. Preeclampsia Aneuploidías ADN fetal en sangre materna Diagnóstico Predicción

20. ADN fetal en sangre materna Dr. Davide Casagrandi Casanova davide@infomed.sld.cu www.scog.sld.cu www.gonzalezcoro.sld.cu