Dha 1 geninin üzerindeki Amp R geninin saptanması için kullanılan primer

1. İRLANDA DUBLİNDE BİR 3. BASAMAK HASTANEDEN İZOLE EDİLEN KLEBSİELLA PNEUMONIAE İZOLATLARININ PLAZMİDİK AMP C B-LAKTAMAZLARININ SAPTANMASI VE MOLEKÜLER TİPLENDİRİLMESİ Araş.Gör.Dr. Fatma Esenkaya Taşbent Yrd. Doç Dr. Mehmet ÖZDEMİR

2. Detectıonandmolecularcharacterısatıon of plasmıdıcAmp C B-lactamasesınKlebsiellapneumoniaeisalatesfrom a tertiary-carehospıtal in Dublin,Ireland 2008 EuropeanSociety of ClinicalMicrobiologyandInfectiousDiseases

3. Dünya genelinde Klebsiellapneumoniaeizolatları arasındaki Amp C B-laktamazlar gittikçe artmaktadır

4. Bununla birlikte dirençli Klebsiellapneumoniaeizlolatları arasından Amp C tipi B-laktmazlarınprevelansı, Amerika da % 8,5 denİngilterede % 55 e kadar bölgesel olarak farklılık göstermektedir

5. İrlanda’daki KlebsiellapneumoniaeAmp C enzimlerinin epidemiyolojisi ve tiplendirilmesi hakkında sınırlı miktarda bilgi var

6. Bu prospektif çalışma plazmid ile ilişkili Amp C B- laktamazları taşıyan Klebsiella pneumoniae izolatlarının epidemiyolojisini belirlediği gibi 3. kuşak sefalosporinlere dirençli Klebsiella pneumoniae izolatları arasındaki Amp C enziminin tipini ve prevelansını da belirlemiştir

7. Seftazidim, sefotaksim ve/veya sefpodoksim gibi 3. kuşak sefalosporinlerin bir yada daha fazlasına dirençli replike olmamış Klebsiella pneumoniae izolatları Nisan 2005 den Mart 2007 ye kadar prospektif olarak toplanmıştır

8. Duyarlılıkları CLSI kriterlerine göre disk difüzyon, E test, agardilüsyon ve VITEC 2 duyarlılık test sistemi kullanılarak belirlendi İzolatlarınidentifikasyonu VITEC identifikasyon sistemine göre yapıldı

9. Amp C B- laktamaz taraması E test ve VITEC 2 ile sefotaksim ve seftazidim MIC lerini ölçülerek ve 100 mg/L kloksasilin içeren ve içermeyen Müller Hinton Medyum kullanılarak yapılmıştır Kloksasilin varlığında MIC deki iki kat veya daha fazla azalma Amp C B-laktamaz varlığını göstermektedir

10. Sefoksitin 30 mg diskinin yanındaki sefotaksim 30 mg yanındaki zonda birleşme Amp C indüksiyonunun tespitinde problem oluşturmaktadır

11. .. Amp C enzimini kodlayan genler Multiplex PCR kullanılarak identifiye edildi. Ardışık PCR ve sekanslama acc geni için 5 – TTTTCTTTTGCATGCGGATT ve 5 – ACAGGGCGTGCTGTAATACC primerlerini, dha geni için 5- ACACTGATTTCCGCTCTGCT ve 5- ACAATCGCCACCTGTTTTTC primerlerini kullanarak oluşturulmuştur

12. Dha 1 geninin üzerindeki Amp R geninin saptanması için kullanılan primer 5 -CAGGGTAAAGCGGTGAACAT dır. Bu çalışmada bildirilen nükleotid sekansları şu numaralar altında (acc-1 için EF554600 ve Amp R ve dha 1 için EF633612) gen bankasında bulunmaktadır İntegron analizleri Levesque ve arkadaşlarının tarifine göre yapılmıştır. Bakteriyel DNA nın lizisi sonrası CHEF DR II sistemi kullanılarak pulsed field gel elektroforez ile izolatlar genotiplendirilmiştir

14. İzolatlar arasındaki ilişki aritmetik ortalama ile eşleşmiş grup yöntemi kullanılarak küme analizleri yapılarak Dice Coefficient kullanılarak hesaplanmıştır 500 K.pneumoniae klinik izolatından 32 sinde en az bir oksiimino B-laktama artmış direnç gösterildi

15. Bu izolatların 15 i (%48i) muhtemel Amp C üreten bakteri olarak seçildi. Bir izolat fenotipik testlere göre klas A tipi ESBLüretmiştir. Geri kalan 17 izolat da, ESBL üreten Klas A fenotipine sahipti 15 seçilmiş izolatın Multiplex PCR la Amp C + olduğu gösterilmiş olup bunlardan 13 ü acc tipi B laktamaz, 2 si ise dha tipi B-laktamaz olduğu tespit edildi 2 izolattan sonuncusunda indüklenebilir direnç bulundu.

16. Nükleotid sekanslamasonucu 13 blaacc geni daha önce gen bankasına girişi yapılanKlebsiellapneumoniaeblaacc-1 sekansı ile % 100 uyumlu bulundu İki bladhagen sekansıda identifiye edildi ve bilinen Klebsiellapneumoniaebladha 1 geni ile %100 uyuma sahipti

17. Ek olarak bla dha 1 gen izolatlarının her ikisinde de Amp R bulundu. PCR sonuçlarına göre dha 1 olan iki izolat ve acc 1 olan bir izolat pozitif olarak izlendi 15 izolatın hepsi karbapenemlere ve sefepime duyarlı idi. Yüksek düzeyde sefoksitin direnci, yalnızca dha 1 üreten 2 izolatta bulundu. 15 izolatın hepsi amoksilin/klavulonik aside dirençli idi. Ama en çok duyarlılık amikasin, gentamisin ve siprofloksasine karşı bulundu

18. Acc 1 üreten 13 izolatın küme analizinde birbirleri ile farklı ilişki düzeyindeki izolatlardan 3 küme oluşturulması düşünüldü Küme 1; bant farklılığı içermeyen 2 tip izolat (7 ve 9) Küme 2; 4 band faklılığı içeren iki izolat (6 ve 14) ve Küme 3; altı band farklılığı içeren 2 izolattan oluşmaktadır Bu üç küme birbiriyle ilişkili değildi Geri kalan izolatlar tamamen birbirinden farklı idi.

19. Sonuç olarak bu çalışma acc1 ve dha1 içeren iki tip plazmidik Amp C enzimini identifiye etmiştir. İrlandadaki Dha 1 üreten plazmidik indüklenebilir Amp C enzimi bulunduran iki izolat ilk defa bildirilirken major kazanılmış Amp C enzimi acc 1 di Bu enzim Klebsiella pneumoniae izolatlarının % 48 den identifiye edildi.

20. Bu oran benzer seleksiyon kriterleri ile, İrlanda ve İngilterede yapılan bir yeni çalışmadaki % 25 lik sıklığa benzemektedir Avrupa içinde yayılan acc 1 geniyle ilgili Fransa ve İspanyadan yapılan diğer bildirimler de benzer sonuçlar içermekteydi Acc üreten Klebsiella pneumoniae izolatlarının çoğu sefoksitine duyarlı idi

21. Farklı olarak, sefoksitin dirençli ise oksiimino B-laktamlara azalmış duyarlılık klas c B-laktamaz üretimini gösterir Klebsiella pneumoniae izolatları sefoksitin ve sefepime duyarlıdır Fakat seftazidim ve sefotaksime duyarlılık azalmıştır

22. Bu durum plazmidik Amp C üretimi ile ilgili olabilir bu nedenle diğer testlerle konfirme edilmelidir. Pulsed field jel elektroforezi, hastane içinde transfer edilebilir Amp C ilişkili direncin insidansını,tek bir klonun yayılımından ziyade mobil bir elementin transferi sonucu olduğunu belirtmektedir. İrlandadaki bu enzimlerin prevelansının ve ortaya çıkışınınsurveyansı gereklidir

23. TEŞEKKÜRLER