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Diagnostic biologique de l’infection à HEV

Diagnostic biologique de l’infection à HEV. Jacques Izopet Laboratoire de Virologie CHU de Toulouse & INSERM U563. XXème Colloque de Virologie Versailles 25/11/2008. Mr D John 62 ans Australien en France depuis 4 ans Consulte son médecin généraliste pour un ictère ATCD :

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Diagnostic biologique de l’infection à HEV

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  1. Diagnostic biologique de l’infection à HEV Jacques Izopet Laboratoire de Virologie CHU de Toulouse & INSERM U563 XXème Colloque de Virologie Versailles 25/11/2008

  2. Mr D John • 62 ans • Australien en France depuis 4 ans • Consulte son médecin généraliste pour un ictère • ATCD : • diabète de type 2 sous metformine et diamicron depuis 2 ans • Habitudes de vie: • consommation d’alcool 30 à 40 g/j • Habite sur une péniche sur le Canal du Midi

  3. Fièvre à 38°C et céphalées • Ictère depuis 2 j • Prise de 1 g de paracétamol la veille de l’hospitalisation • Biologie : • ASAT : 4500 UI/l • ALAT : 5000 UI/l • Phos Alc : N • GT : 133 UI/l • TP : 26% CAT pratique ?

  4. Circonstances épidémiologiques • Afrique-Asie-Amérique centrale •  endémie élevée •  épidémies avec transmission hydrique •  cas sporadiques • Pays industrialisés •  cas sporadiques : autochtones >> importés •  régions endémiques • Boutrouille JCM 07 ; Mansuy JMV 08

  5. Facteurs de risque • Exposition directe à un réservoir animal liée à une activité professionnelle ou de loisir • Habitudes alimentaires • Exposition environnementale

  6. Circonstances cliniques • Hépatite symptomatique : ictère, fièvre, asthénie, nausées, vomissements,… • Formes particulières : manifestations articulaires, thrombopénie • Formes asymptomatiques : élévation des ALAT

  7. Facteurs de gravité • Femme enceinte • Hépatopathie chronique sous-jacente • Immunodépression thérapeutique : chimiothérapie anticancéreuse ou transplantation

  8. Outils virologiques Diagnostic indirect Diagnostic direct   Dépistage sérologique IgG IgM Dépistage génomique Sang Selles

  9. Cinétique des marqueurs symptômes virus dans les selles virémie IgG IgM Transaminases 4 mois 20 30 40 50 60 jours 3 10 après infection contage

  10. Stratégie diagnostique • Niveau d’endémie national ou régional •  recherche ou non des marqueurs HEV en 1ère ligne • Tests disponibles au laboratoire • NABM : •  Anticorps anti-HEV : B70 •  ARN HEV : BHN 250 • Dalton Lancet 07 ; De Silva JMV 08

  11. Tests sérologiques & antigènes utilisés Génotype 1, 2 1, 2 1 Ag recombinant Peptide synthétique Ag recombinant Genelabs Adaltis MP Diagnostics 91-123 619-660 573-660 III 101-123 II 394-660 ORF 2.1

  12. Evaluation des tests IgM anti-HEV • Trousses •  EIAgen IgM HEV Adaltis •  IgM HEV ELISA MP Diagnostics  Assure HEV IgM Rapid test MP Diagnostics • Panels •  Panel A : 50 sérums ARN HEV (+), G3  Panel B : 406 sérums IgG ARN HEV (-) • anti-HEV (-)

  13. Echantillons ARN HEV (+) IgM anti-HEV anti-HEV IgG Microplaque Adaltis MicroplaqueMP Diagnostics Test rapideMP Diagnostics positif négatif positif négatif positif négatif Positif (n=41) 40 1 39 2 37 4 Negatif (n=9) 5 4 5 4 4 5 Total (n=50) 45 5 44 6 41 9

  14. Performance Sensibilité % Spécificité % VPP % VPN % Microplaque Adaltis 90 100 100 98.8 Microplaque MP Diagnostics 88 99.5 95.7 98.5 Test rapide MP Diagnostics 82 100 100 97.8

  15. Tests sérologiques spécialisés • Quantification des IgG •  dilutions de raison 2 / UA ou UI • Avidité des IgG urée 5M • IgA • Western-blot Rendall JMV 08 ; Zhang JMV 02 ; Takahashi JCM 05

  16. Tests moléculaires • Détection ARN HEV : RT-PCR conventionnelle RT-PCR temps réel •  tests non commercialisés / protocoles validés / EEQ essentiel •  amorces / sonde ORF2  limite de détection 500 c/ml • Mansuy JCM 04 ; Mansuy JMV 04 • Quantification ARN HEV : RT-PCR temps réel • Caractérisation ARN HEV par séquençage

  17. Echantillons pertinents • Sang : prélèvement de choix • Selles : gain de 15 % vs sang uniquement • Salive : rarement positif

  18. Hépatites E aiguës en Midi-Pyrénées Number of cases Rainfall (mm) 25 300 250 20 200 15 150 10 100 5 50 0 0 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Trimesters Periods 2003 2004 2005 2006 2007 2003 to 07 Mansuy JCV 08

  19. Données cliniques Symptômes Jaunisse Asthénie Fièvre Arthromyalgie Douleur abdominale Céphalée Nausée Anorexie Perte de poids Diarrhée Eruption (%) 67.7 40.3 27.4 21 11.3 9.7 9.7 8.1 6.5 4.8 3.2 Démographie H/F : 41/21 Age : 58 (20-82)

  20. Hépatites E chez l’immunodéprimé • Evolution chronique dans 2 situations : •  Chimiothérapie anticancéreuse • Peron JGH 06 ; Tamura Hepatol Res 07 •  Transplantation • Kamar NEJM 08 ; Haagsma Liver Transpl 08 • Progression vers la cirrhose possible : Gerolami NEJM 08 ; Kamar AJT 08

  21. Lésions histologiques A Hépatite aiguë C B Hépatite chronique après 15 mois d’évolution Cirrhose E après 3 ans d’évolution Kamar AJT 08

  22. Diversité du génotype 3 ORF3 M Y P V X H R Capside ORF1 ORF2 HV ORF1 RdRp ORF2 Capside Polymérase Région hypervariable

  23. 2 1 4 3 3b 3c 3e région ORF2 348nt 3f Souches humaines locales Souches porcines

  24. AF444002-1b-Pakistan L25595-1b-China M80581-1b-Pakistan L08816-1b-China M94177-1b-China D11092-1b-China D11093-1b-China X98292-1b-China AF076239-1a-India 1 AF459438-1a-India D10330-1a-Burma 100 M73218-1a-Burma AF051830-1a-Nepal 94 X99441-1a-India 2 AF185822-1a-Pakistan AY204877-1e-Chad AY230202-1d-Morocco M74506-2-Mexico AB091395-4c-Japan 91 AB099347-4c-Japan AB200239-4c-Japan AB09781-4c-Japan AB080575-4c-Japan AB097811-4cJapan-swine AB074915-4c-Japan 4 3 AB074917-4c-Japan AB161718-4c-Japan AB161717-4c-Japan AB108537-4e-China AJ272108-4d-China AY594199-4d-China-swine AB189071-3b-Japan-deer 78 AB189073-3b-Japan 3b AB189074-3b-japan AB189075-3b-Japan AB189072-3b-Japan AB189070-3b-Japan-boar AP003430-3b-Japan AB091394-3b-Japan TLS39 89 AB074918-3a-Japan AB074920-3a-Japan AB089824-3a-japan AF060668-3a-USA 100 AF082843-3a-USA-swine 98 AB073912-3a-Japan-swine 3c AY115488-3j-Canada-swine TLS41 TLS40 AF455784-3-Kyrgyzstan-swine 3e TLS38 AB248520-3e-Japan TLS42 AB248522-3e-Japan-swine TLS36 ORF1 Région RdRp 383 nt TLS35 TLS37 TLS31 TLS32 TLS33 TLS34 TLS28 TLS19 TLS12 TLS10 TLS11 TLS14 TLS13 TLS6 3f TLS8 TLS3 TLS2 TLS1 TLS5 TLS4 TLS7 TLS9 TLS18 TLS18 TLS16 Souches humaines locales TLS15 TLS30 TLS29 TLS27 Souches porcines TLS26 TLS25 TLS24 TLS23 TLS22 TLS21 TLS20 0.1

  25. AF444002-1b-Pakistan M80581-1b-Pakistan L25595-1b-China D11092-1b-China L08816-1b-China M94177-1b-China D1109-1b-China X98292-1b-China AF076239-1a-India AF459438-1a-India X99441-1a-India 1 AF051830-1a-Nepal M73218-1a-Burma D10330-1a-Burma 100 2 AF185822-1a-Pakistan AY204877-1e-Chad AY230202-1d-Morocco M74506-2a-Mexico AB091395-4b-Japan 3 AB200239-4c-Japan AB099347-4b-Japan 100 AB097811-4b-Japan-swine AB097812-4b-Japan AB080575-4b-Japan AB074917-4c-Japan 99 4 AB161718-4c-Japan AB161717-4c-Japan AB074915-4c-Japan 78 AJ272108-4e-China AY594199-4d-China-swine 3e AB108537-4e-China AF455784-3g-Kyrgyrstan-swine AB248522-3e-Japan-swine AB248520-3e-Japan TLS42 AB189074-3b-Japan 3b AB189075-3b-Japan 100 AB189073-3b-Japan AB189070-3b-Japan-boar AP003430-3b-Japan AB091394-3b-Japan AB073912-3b-Japan-swine AB074918-3a-Japan 100 AB074920-3a-Japan AB089824-3a-Japan AF082843-3a-USA-swine AF060668-3a-USA 3c AY115488-3j-Canada-swine 75 TLS39 TLS41 ORF1 Région HVR 345 nt TLS40 TLS38 TLS32 TLS33 TLS34 TLS28 TLS31 TLS36 TLS37 TLS35 TLS25 TLS26 TLS24 TLS23 TLS21 TLS22 TLS20 3f TLS29 TLS30 TLSE19 TLS27 TLS17 TLS18 TLS16 TLS15 TLS04 Souches humaines locales TLS05 TLS07 TLS08 TLS06 Souches porcines TLS13 TLS14 TLS12 TLS10 TLS11 TLS09 TLS02 TLS03 TLS01 0.1

  26. AB189071-3b-Japan-deer AB189072-3b-Japan AB189070-3b-Japan-boar 3b 100 AP003430-3b-Japan AB091394-3b-Japan Génome complet AB073912-3b-Japan-swine 100 AB074918-3a-Japan AB074920-3a-Japan 3a AB089824-3a-Japan 100 AF060668-3a-USA AF082843-3a-USA-swine AY115488-3j-Canada-swine 3 100 AB290312-3-Mongolia-swine 3e AB248522-3e-Japan-swine 100 AB248521-3e-Japan-swine 100 3f AB248520-3e-Japan TLS25 100 AF455784-GC-3g-kyrgyrztan-swine AB099347-4c-Japan 100 AB200239-4c-Japan AB097812-4c-Japan AB097811-4c-Japan-swine AB080575-4c-Japan 1 AB074917-4c-Japan 100 100 AB161718-4c-Japan AB161717-4c-Japan 4 AB074915-4c-Japan 100 AB108537-4g-China 100 AJ272108-4d-China 2 100 AY594199-4d-China-swine M74506-2a-Mexico AY204877-1e-Chad 100 AY230202-1d-Morocco L08816-1b-China M94177-1b-China 93 L25595-1b-China Souches humaines locales D11092-1b-China D11093-1b-China Souches porcines X98292-1b-China AF185822-1a-Pakistan AF051830-1a-Nepal X99441-1a-India AF076239-1a-India AF459438-1a-India Abravanel EID sous presse D10330-1a-Burma M73218-1a-Burma 0.1

  27. Transmission nosocomiale ? Mansuy CID sous presse

  28. Synthèse • HEV constitue un pathogène émergent pour les pays industrialisés justifiant une stratégie diagnostique adéquate : sérologie + BM • Transmission zoonotique hautement probable mais modes de transmission encore inconnus  projet multidisciplinaire ANR HEVZOONEPI • Formes chroniques : modèle inattendu pour étudier les mécanismes de persistance virale

  29. Remerciements Laboratoire de Virologie Florence Abravanel Martine Dubois Jean-Michel Mansuy Services d’Hépatologie & Médecine Interne Jean-Marie Péron Laurent Alric Service de Néphrologie & Transplantation Nassim Kamar Lionel Rostaing

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