CARVALHO, Daniel Cardoso; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; GODINHO, Hugo (c); GODINHO, Alexandre (c)

1. ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE MARCADORES MICROSATÉLITE EM DE Prochilodus scrofa CARVALHO, Daniel Cardoso; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; GODINHO, Hugo (c);GODINHO, Alexandre (c) Departamento de Farmacologia e Departamento de ZoologiaICB-UFMG

2. Crescimento populacional Maior demanda de energia elétrica Construção de represas Interrupção de vias migratórias O Problema

4. Metodologia • Biblioteca Genômica • Isolamento dos clones • Hibridização • Sequenciamento

5. Biblioteca de DNA Genômico Sítio de corte da enzima utilizada deixando extremidades coesivas Mapa do vetor utilizado

6. Biblioteca de DNA Genômico Escolha da enzima apropriada para a montagem da biblioteca Divisão das frações da biblioteca Corte do DNA total com Sau3A

7. ELETROPORAÇÃO Técnica de transformação bacteriana utilizada (eletroporação)

8. Isolamento dos clones Isolamento dos clones da biblioteca seguido de PCR ou mini-prep para a posterior aplicação na membrana

9. Hibridização Hibridização com sondas radioativas Oligonucleotídeos utilizados como sonda: CA, TC, CTT, ACGA, TA, GGA, AAAG,TATC

10. Sequenciamento Equipamento de Sequenciamento automático utilizado: ABI 310

11. Sequenciamento Seqüência de um dos microsatélites encontrados Seqüência de outro dos microsatélites encontrados

12. Estudo Populacional • PCR dos loci de microsatélite de cada indivíduo. • Gel de poliacrilamida dos produtos de PCR.

13. Estudo Populacional • Montagem de tabela com nº e freqüência de MS. • Cálculo da heterozigosidade observada e esperada.

14. Resultado do Estudo Populacional • Definição da distância genética e fluxo gênico entre as populações. Árvore Genealógica • Verificação da necessidade de construçãode mecanismos de transposição.

15. Segundo Problema: Se confirmado a existência de diferentes populações: Como Provar que as populações de peixe já não estavão separadas antes da construção das hidrelétricas?

16. DNA mitocôndrial