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致敏原 检测 ELISA 法 操作步骤

致敏原 检测 ELISA 法 操作步骤. Ulrike Immer and Sigrid Haas-Lauterbach. IQTC/ICC/R-Biopharm Allergen Workshop Guangzhou, China 27 th / 28 th , 2009. 样品处理 RIDASCREEN  ELISA 操作步骤. 称取 1mg 样品到 50mL 离心管中 加入 20mL 预热的提取缓冲液 (60 ℃ ) 盖紧瓶盖. 试剂盒中提供 致敏原提取缓冲液（ 20 倍浓缩）. 样品处理 RIDASCREEN  ELISA 操作步骤.

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致敏原 检测 ELISA 法 操作步骤

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Presentation Transcript

  1. 致敏原检测 ELISA法操作步骤 Ulrike Immer and Sigrid Haas-Lauterbach IQTC/ICC/R-Biopharm Allergen Workshop Guangzhou, China 27th / 28th, 2009

  2. 样品处理 RIDASCREEN ELISA 操作步骤 称取1mg样品到50mL离心管中 加入20mL预热的提取缓冲液(60℃) 盖紧瓶盖 试剂盒中提供 致敏原提取缓冲液（20倍浓缩）

  3. 样品处理 RIDASCREEN ELISA 操作步骤 充分混合(使用涡旋振荡器) 60℃水浴，孵育10 min 冷却到室温(可使用冰浴)

  4. 样品处理 RIDASCREEN ELISA 操作步骤 过滤样品或离心(2500 rpm ，10 min) 离心 样品中含有不易沉降的颗粒 样品非常粘稠不易过滤 如果样品提取含有奶粉，处理后应放入冰箱 如果需要，可用提取缓冲液稀释样品 有颜色的样品不受影响

  5. 样品处理 RIDASCREEN ELISA 操作步骤 将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架 (孔内包被有抗体，不要污染) 对每个孔条进行编号 记录下标准品和样品的位置

  6. 样品处理 RIDASCREEN ELISA 操作步骤 分别加到对应孔中: 100 µL 标准溶液 或100 µL制备好的样品溶液 在桌面上振荡 将微孔板封好 室温孵育10 min

  7. 样品处理 RIDASCREEN ELISA 操作步骤 10 min孵育完成后，将孔内液体倒出 将微孔板倒置在吸水纸上进行拍打 每孔加入250 µL洗板缓冲液 重复洗板三次

  8. 样品处理 RIDASCREEN ELISA 操作步骤 稀释酶标抗体1:11 （100 µL稀释酶标抗体+ 1 mL蒸馏水) 每孔加入100 µL 稀释好的酶标抗体 在桌面上振荡 将微孔板封好 室温孵育10 min

  9. 样品处理 RIDASCREEN ELISA 操作步骤 10 min孵育完成后，将孔内液体倒出 将微孔板倒置在吸水纸上进行拍打 每孔加入250 µL洗板缓冲液 重复洗板三次

  10. 样品处理 RIDASCREEN ELISA 操作步骤 三次洗板完成后， 每孔加入 100 µL 底物-/发色剂溶液 在桌面上振荡 将微孔板封好 室温黑暗孵育10 min 每孔加入100 µL 反应终止液

  11. 样品处理 RIDASCREEN ELISA 操作步骤 在450 nm测量吸光度值 使用RIDASOFT Win软件 计算结果 OD 450 nm mg/kg (全蛋粉)

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