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Elyara Helder Wendy

Elyara Helder Wendy. Abordagens. Diferenciação/Desenvolvimento de Th2. STAT3. STATs e Diferenciação. Diferenciação e epigenética. STATs X Células T CD4 +. Cytokine, 47: 149-156, 2009. JAK/STATs X Células T CD4 +.

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Presentation Transcript

  1. Elyara Helder Wendy

  2. Abordagens... • Diferenciação/Desenvolvimento de Th2 • STAT3 • STATs e Diferenciação • Diferenciação e epigenética

  3. STATs X Células T CD4+ Cytokine, 47: 149-156, 2009.

  4. JAK/STATs X Células T CD4+ Arch Immunol Ther Exp, 55: 231-245, 2007; Transplantation, 85: 1372-1377, 2008; Cytokine, 47: 149-156, 2009.

  5. STATs X Células T CD4+ Curr Opin Immunol, 21(2): 161-166, 2009.

  6. STAT3 - Estrutura Apresenta 6 domínios conservados Interação com DNA Interação com PY Interação proteína-proteína Atividade transcricional Arch Immunol Ther Exp, 55: 231-245, 2007; Transplantation, 85: 1372-1377, 2008; Cytokine, 47: 149-156, 2009.

  7. STAT3 - Função Importância de STAT3 → camundongos stat3-/- → morte durante o desenvolvimento embrionário Proc Natl Acad Sci USA 94: 3801-3804, 1997.

  8. STAT3 - Função Ativado por diversas citocinas e fatores de crescimento Clin Cancer Res, 13::5665-5669, 2007; Transplantation, 85: 1372-1377, 2008; Cytokine, 47: 149-156, 2009.

  9. STAT3 - Função ↑ expressão de genes com funções inibitórias (IL-10, TGF-β); ↓ expressão de genes com funções pro-inflamatórias (IFNs, IL-12, TNF, MHCII, CD80/86) Transplantation, 85: 1372-1377, 2008; Cytokine, 47: 149-156, 2009.

  10. STAT3 - Tumor Transplantation, 85: 1372-1377, 2008; Curr Opin Immunol, 20(2): 228-233, 2008.

  11. STAT3 – Células T STAT3 → papel crítico em vários tecidos Células T CD4+ stat3-/- Nenhum déficit evidente no desenvolvimento Timo e compartimentos periféricos normais Reduzida proliferação dependente de IL-6 e IL-2 Int Immunol, 10: 1747-1751, 1998; J Immunol, 161: 4652-4660, 1998. .

  12. STAT3 – Diferenciação de células Th17 Transplantation, 85: 1372-1377, 2008; Cytokine, 47: 149-156, 2009; Curr Opin Immunol, 21(2): 161-166, 2009. .

  13. STAT3 – Doenças inflamatórias crônicas Uveite → grupo de doenças inflamatórias intraocular → envolvimento das células Th17 Modelo em camundongo: Células T reativas – Th17 Doença inibida com anti-IL-17 CD4stat3-/- - resistentes a uveite Nat Med, 13: 711-718, 2007 .

  14. STAT3 – Doenças inflamatórias crônicas Inflamação intestinal crônica → envolvimento das células Th17 e STAT3

  15. STAT3 – Th2

  16. Objetivo Demonstrar função de STAT3 no padrão de resposta Th17 (modelo de colite) e na expansão homeostática de TCD4+ naïve nos órgãos linfóides

  17. Estabelecimento de modelo de colite, através da transferência de células TCD4+ naïve, para avaliar papel do STAT3 Controle: Stat3fl/fl TCD4+ Baço e linfonodos TCD4+ naïve CD25-CD45RBhigh iv 4.105 Rag2-/- (Stat3-/-): Cd4 Cre; Stat3fl/fl

  18. Estabelecimento de modelo de colite, através da transferência de células TCD4+ naïve, para avaliar papel do STAT3 9 weeks STAT3 foi, portanto, crítico para o desenvolvimento de colite (órgão específico), bem como para respostas inflamatórias sistêmicas.

  19. Papel de STAT3 no diferenciação deTh17: responsável pela produção de IL-17? TCD4+ naïve CD25-CD45RBhigh Controle: Stat3fl/fl Lâmina Própria Linfonodos Mesentéricos Baço 9 semanas FACS TCD4+ IL17+ Rag2-/- (Stat3-/-): Cd4 Cre; Stat3fl/fl STAT3 é necessário para a produção de IL-17A, mas não para IFN-γ, em células TCD4+, utilizado modelo de colite.

  20. Papel de STAT3 na conversão de células TCD4+ naïve para Treg em modelo de colite Concentração homeostática de Treg nos doadores de TCD4+ Lâmina Própria Linfonodos Mesentéricos Baço Controle: Stat3fl/fl FACS TCD4+ Foxp3+ (Stat3-/-): Cd4 Cre; Stat3fl/fl STAT3 tem pouco efeito sobre a expressão de Foxp3 em células TCD4+, na ausência de inflamação.

  21. Papel de STAT3 na conversão de células TCD4+ naïve para Treg em modelo de colite Concentração de Treg em ambiente inflamatório TCD4+ naïve CD25-CD45RBhigh Controle: Stat3fl/fl Lâmina Própria Linfonodos Mesentéricos Baço 9 semanas FACS TCD4+ Foxp3+ Rag2-/- (Stat3-/-): Cd4 Cre; Stat3fl/fl STAT3 inibi a conversão de TCD4+ naïve para Treg Foxp3+, em ambiente inflamatório.

  22. TCD4+ naïve CD25-CD45RBhigh IL-17A + Foxp3 + Score Clínico (Stat3-/-) Cd4 Cre; Stat3fl/fl Rag2-/-

  23. STAT3 regula então quais genes envolvidos na diferenciação de padrão Th17? Regulação gênica Controle: Stat3fl/fl ChIP-Seq anti-pSTAT3 anti-H3K4Me anti-CD3, anti-CD28 IL-6, TGF-β, anti-IL-2, anti-IL-4 e anti-IFN-γ IL-6 1h TCD4+ Baço e linfonodos TCD4+ naïve CD4+CD44-CD62L+ (Stat3-/-): Cd4 Cre; Stat3fl/fl 72h STAT3 liga-se a mais de 3000 genes Liga-se a muitos genes associados a diferenciação de Th17

  24. Szalkowski A M , Schmid C D Brief Bioinform 2010;bib.bbq068

  25. STAT3 regula então quais genes envolvidos na diferenciação de padrão Th17? Expressão gênica Controle: Stat3fl/fl anti-CD3, anti-CD28 IL-6 e/ou TGF-β, anti-IL-2, anti-IL-4 e anti-IFN-γ IL-6 1h Microarray PCR em Tempo Real TCD4+ Baço e linfonodos TCD4+ naïve CD4+CD44-CD62L+ (Stat3-/-): Cd4 Cre; Stat3fl/fl 72h STAT3 regula positivamente modificações epigenéticas nos genes em que é alvo, aumentando sua expressão e, portanto contribui para estabilidade do padrão Th17.

  26. Ainda no modelo de inflamação sistêmica através de colite ... TCD4+ naïve CD25-CD45RBhigh • Lâmina Própria • Linfonodos Mesentéricos • Baço Controle: Stat3fl/fl 9 semanas FACS TCD4+ Rag2-/- (Stat3-/-): Cd4 Cre; Stat3fl/fl Apesar da ausência de inflamação corroborar com pequeno infiltrado de células no recipiente Rag2-/-, porque as células TCD4+ Stat3-/- não se acumulam num recipiente linfopênico?

  27. Criando-se um ambiente inflamatório junto com a transferência de células TCD4+ Stat3-/-, estas acumular-se-iam nos órgãos linfóides? • Lâmina Própria • Linfonodos Mesentéricos • Baço 9 semanas FACS TCD4+ CD45.1 TCD4+ Cd4 Cre; Stat3 fl/fl Portanto, STAT3 tem papel importante na expansão de células T, num ambiente inflamatório.

  28. E como seria a expansão das células TCD4+ na ausência de inflamação? TCD4+ naïve CD25-CD45RBhigh Controle: CD45.1 2 semanas • Linfonodos Mesentéricos • Baço FACS TCD4+ Rag2-/- (Stat3-/-): Cd4 Cre; Stat3fl/fl A inabilidade de células TCD4+ Stat3-/- em acumular-se indica que STAT3 tenha papel na expansão de células T, anterior ao estabelecimento da inflamação.

  29. Qual seria a importância de STAT3 na expansão homeostática de células T? • Timo • Linfonodos Mesentéricos • Baço Controle: CD45.1 8 semanas Medula óssea FACS células T Rag2-/- (Stat3-/-): Cd4 Cre; Stat3fl/fl

  30. Qual seria a importância de STAT3 na expansão homeostática de células T? • Timo • Linfonodos • Baço Controle: CD45.1 MO 1:1 8 sem FACS TCD4+ CD45.1 TCD4+ Cd4 Cre; Stat3 fl/fl Rag2-/- (Stat3-/-): Cd4 Cre; Stat3fl/fl Modelo reconstituição competitiva Portanto, STAT3 tem papel essencial na proliferação celular de TCD4+ não somente em ambientes patológicos, mas também a partir de células tronco.

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