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UPC II – Microbiologia

UPC II – Microbiologia. Aula prática 4. 2013/20134. Maria José Correia 7/10/2013. Sumário P4:. Observação de bactérias do biofilme oral Preparação de esfregaço Técnicas de coloração: Colorações diferenciais (Coloração de Gram). Técnicas de coloração.

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Presentation Transcript

  1. UPC II – Microbiologia Aula prática 4 2013/20134 Maria José Correia 7/10/2013

  2. Sumário P4: • Observação de bactérias do biofilme oral • Preparação de esfregaço • Técnicas de coloração: • Colorações diferenciais (Coloração de Gram) UPC II - Microbiologia 2013/2014

  3. Técnicas de coloração • Permitem revelar a forma, a dimensão e os componentes das células bacterianas, bem como, os aspetos bioquímicos da sua estrutura. • Permitem observar células bacterianas em microscopia de campo claro. • Como o índice de refração do protoplasma bacteriano difere muito pouco do meio circundante, é difícil o exame direto de preparações não coradas, a não ser que se utilizem técnicas especiais de iluminação. UPC II - Microbiologia 2013/2014

  4. Técnicas de coloração • Preparação do esfregaço • Fixação do esfregaço • Coloração • Observação ao microscópio UPC II - Microbiologia 2013/2014

  5. Preparação e fixação do esfregaço • Preparado sobre uma gota de água abrangendo uma superfície de 1 cm2 • As lâminas usadas devem ser lavadas com uma mistura de álcool-éter (1:1) • Fixação pelo calor em movimentos circulares. • Evitar aquecer demasiado a preparação para não destruir as células UPC II - Microbiologia 2013/2014

  6. Em caso de incêndio…. Manter a calma!!… os movimentos rápidos alimentam a combustão NÃO APAGAR O FOGO COM ÁGUA Tapar o frasco e a lamparina Cobertor Extintor UPC II - Microbiologia 2013/2014

  7. http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htmhttp://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm Coloração de Gram • Coloração diferencial • Distingue bactérias Gram + de bactérias Gram- • Indispensável na identificação bacteriana Gram + Gram - UPC II - Microbiologia 2013/2014

  8. Bactérias Gram+ e Gram- • Composição diferente da parede celular • Gram+: Parede homogénea e espessa, formada essencialmente por peptidoglucano, baixa percentagem de lipoproteínas. • Gram-: Parede fina, camada de peptidoglucano fina, camada externa complexa, formada por lipoproteínas e polissacarídeos UPC II - Microbiologia 2013/2014

  9. Coloração de Gram dH2O dH2O Violeta de cristal 1 minuto Lugol (iodo) 1 minuto Álcool 30-60 segundos Safranina 30-60 segundos UPC II - Microbiologia 2013/2014

  10. Objetivo desta coloração • Usar as colónias isoladas na aula anterior para fazer a coloração de Gram e distinguir se são Streptococcus. • Só depois fazer a repicagem das colónias. UPC II - Microbiologia 2013/2014

  11. UPC II - Microbiologia 2013/2014

  12. Trabalho a realizar: • Observação das placas feitas na aula anterior. • Registo das características das colónias. • Isolamento de colónias (biofilme oral): • Repicagem (riscado em placa). • Usar uma placa nova e repicar uma colónia da placa anterior. • Coloração de Gram das cplónias para escolher streptococcus. UPC II - Microbiologia 2013/2014

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