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Escherichia coli O157:H7 et les Escherichia producteurs de Shigatoxines (STEC)

Escherichia coli O157:H7 et les Escherichia producteurs de Shigatoxines (STEC) dans la viande: Quelles sont les dernières découvertes  ?. 25 Oct. 2005. Seize enfants ont été hospitalisés pour une « intoxication alimentaire grave » après avoir consommé des steaks

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Escherichia coli O157:H7 et les Escherichia producteurs de Shigatoxines (STEC)

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Presentation Transcript

  1. Escherichia coli O157:H7 et les Escherichia producteurs de Shigatoxines (STEC) dans la viande: Quelles sont les dernières découvertes  ?

  2. 25 Oct. 2005 Seize enfants ont été hospitalisés pour une « intoxication alimentaire grave » après avoir consommé des steaks hachés surgelés distribués par Leclerc, dans 19 départements du Sud Ouest. Intoxication au steak haché

  3. Alerte à la viande avariée en France (24/03/08)

  4. DOSES INFECTIEUSES TRES BASSES QUELQUES BACTERIES /25 g Multiplication bactérienne non nécessaire, contamination suffisante!!! Acidoresistance !!

  5. La coupable !!

  6. Comment faire ?????

  7. Vers une nouvelle classification des souches pathogènes ?

  8. Lésions d ’attachement et d’effacement (Knutton et al, Infect. Immun. 1987) gène eae ( LEE sur îlot de pathogénicité PAI III) (nombreux variants !!) Productionde verotoxines = shigatoxines ( gène stx)

  9. Verotoxine ou shigatoxine Nouvelle dénomination Ancienne dénomination gène protéine Toxine de Shiga stx Stx 99 % d'homologie Toxine Shiga-like de type I ou (SLT-I) ou vérotoxine 1(VT1) stx1 Stx1 55 % d'homologie SLT-II ou VT2 stx2 Stx2 Stx2c/d 90% d'homologie SLT-IIc/d ou VT2c/d stx2c/d stx 2e/f Stx2e/f SLT-II/f ou VT2e/f Autres variants décrits très récemment : stx2 g, . stx2-NV206

  10. Sérotype O157:H7 • Autres sérotypes..mais liste non exhaustive • Stx2 et eae et SHU : (Ethelberg et al. 2004 (Danemark), Tarr et al. 2005, Karmali 2004 • Marqueur de virulence des STEC ? Acidoresistance ???

  11. SOUCHE STEC PATHOGENE Définition actuelle de l’AFSSA • Appartient aux sérogroupes O157:H7, O26, O103, O111 ou O145 • ET • Stx+ et eae+

  12. Approche MRA molecular risk assessment (Coombs et al 2008)Congrés du PEN 4-5 mars 2008 à Rome • Îlots de pathogénicité, • O-Island • Séropathotype • Variants eae , stx

  13. DETERMINATION DES FACTEURS DE VIRULENCE • O26 • flagelle H11 • eae (variants) • stx commun, stx 1 et stx 2 et variants stx2 • Îlot O122: Z4321, Z4326, Z4332, Z4333

  14. Z4332 Z4321 Z4333 Z4326

  15. Les « EHEC typiques » • EHEC O157:H7 = rfbEO157, flicH7, stx1 et/ou stx2, eae-gamma, O#122. • EHEC O26:H11 = wzxO26, flicH11, stx1 et/ou stx2, eae-beta, O#122. • EHEC O145:H28 = ihp1O145, flicH28, stx1 et/ou stx2, eae-gamma, O#122. • EHEC O103:H2 = wzxO103, flicH2, stx1 et/ou stx2, eae-epsilon, O#122. • EHEC O111:H8 = wbd1O111, flicH8, stx1 et/ou stx2, eae-theta, O#122.

  16. SOUCHE STEC PATHOGENE Définition de l’AFSSA • Appartient aux sérogroupes O157:H7, O26, O103, O111 ou O145 • ET • Stx+ et eae+ • Mais définition en cours de révision par l’AFSSA (AST de la DGAL transmise début mai 2008)

  17. Quels sont les E. coli que les industriels doivent prendre en considération dans leur plan HACCP, pourquoi ?

  18. E. coli O157:H7 stx+ et eae+ Séropathotype A E. coli O26, O111, O103, O145 stx+, eae+ Séropathotype B STEC (autres sérotypes)

  19. Quelles sont les méthodes de détection actuellement reconnues ? Quel est le rôle du laboratoire national de référence dans la validation des méthodes de détection ?

  20. E. coli O157:H7

  21. Deux méthodes validées AFNOR en France et une norme ISO • Séparation Immunomagnétique (Dynabeads. Dynal) Norme ISO EN 16654 • Méthode VIDASTM (bioMérieux) • Méthode Bax (Oxoid)

  22. Bactéries E. coli O157 et billes magnétiques (microscopie électronique)

  23. VIDAS biomérieux

  24. VIDAS: Sample preparation Sample Heating step 15 min 95°C 45min Test

  25. ) BAX Oxoid

  26. REAL TIME PCR: Sample preparation Lysis buffer Sample 20min 37°C 10min 95°C 5 min 4°C Bacterial lysis mix PCR PCR

  27. Real Time PCR: Sample preparation Sample 45 min Bacterial lysis 3h 30min PCR

  28. Enrichissement 8H pour les 2 méthodes • Taux de non isolement du pathogène après message présomptif (2à 5 pour 1000) pour le VIDAS, pas de recul en France pour le Bax • Attention phase d’immunoconcentration nécessaire avant isolement !!! Prévoir IMS après le BAX • Boites avec colonies suspectes à confirmer par le LNR

  29. Utilisation des caractéristiques biochimiques de E. coli O157:H7 (Mutants!) • sorbitol – • b-glucuronidase– • rhamnose – • Résistance intermédiaire au céfixime et au tellurite

  30. Milieu CHROM agar Milieu CT-SMAC Milieu O157:H7

  31. Méthodes nouvelles.. • Délai d’analyse <8h • Echantillon composite (375g)

  32. METHODES DE DETECTION DES STEC non O157 AUCUNE CARACTERISTIQUE BIOCHIMIQUE COMMUNE !!!!!

  33. eae +

  34. eae +

  35. Inconvénients • PCR (même en temps réel) signification d’un message positif. Genesystem • Quid de l’enrichissement commun de l’ensemble des 5 sérogroupes de STEC ?? Non optimisé à ce jour • Quid de l’isolement des souches STEC? (taux de confirmation??) • Outil validé pour screening en PCR sur souches STEC pures mais validation nécessaire sur matrices

  36. Résultats du Plan de surveillance VH surgelées 2007

  37. 3,7% Taux de confirmation= 9%

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