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Tutorial de Uso Básico. Zeiss 04. Zeiss 04 “ Tutorial de Uso”. Características Zeiss 04……………………..……....pag.3-4 Pasos iniciales Uso Zeiss 04………………………….pag. 5 Luz Transmitida Trabajo con luz transmitida Campo Claro…………………………………………………..…pag. 6
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Tutorial de Uso Básico Zeiss 04 Tutorial Zeiss 04
Zeiss 04 “Tutorial de Uso” Características Zeiss 04……………………..……....pag.3-4 Pasos iniciales Uso Zeiss 04………………………….pag. 5 Luz Transmitida Trabajo con luz transmitida Campo Claro…………………………………………………..…pag. 6 Trabajo con luz transmitida Contraste de Fases/Ph………….……………….………………...…pag.7-8 Trabajo con luz transmitida Contraste Interdiferencial DIC……………….………………………………...…pag.9-10 Fluorescencia Trabajo con luz reflejada (fluorescencia)………………………………….…..pag.11-12 Utilidades de Interés ……………………………....pag.13-15 Tutorial Zeiss 04
Microscopio de Luz Transmitida -Campo Claro -Contraste Interdiferencial (DIC) -Contraste de Fases (PH) Zeiss 04 APLICACIONES. Microscopio de Fluorescencia Filtros : 1-Rojo 9-Verde 15-Triple Cyan CFP Localización : Microscopía Planta – 0 Tutorial Zeiss 04
Filtros Fluorescencia: -Rojo -Verde -Triple -Azul Cyan Zeiss 04 CARACTERISTICAS. Objetivos : x 10 (Fase 1) (DIC) x 20 (Fase 1) (DIC) x 40 (Fase 2) (DIC) x 40 oil (Fase 3) (DIC) x 63 oil (Fase 3) (DIC) x 100 oil (Fase 3) (DIC) Filtros/Anillos DIC -DIC I -DIC II -DIC III Filtros/Anillos Fases -Fase I -Fase II Condensador : 0´9 Equipo conectado : -Cámara Hamamatsu (ORCA-Er-c4742-95) -AttoArc 100W -Mac Power G4 Programa OPENLAB asociado Tutorial Zeiss 04
Pasos Iniciales Uso Zeiss 04 2-Encendemos el Ordenador asociado ( MAC) para acceder al programa de captura de imágenes “Openlab”. 1-Encendemos el microscopio Zeiss 04 (botón lateral derecho). 3-Encendemos la cámara asociada al equipo para la captura de imágenes (cámara Hamamatsu). Tutorial Zeiss 04
Trabajar en Luz Transmitida (Campo Claro)(BF) 1-Colocamos la Rueda en posición D ( Campo Claro, luz transmitida Normal). 1 2-Retiramos de la vía de luz (desplazar a la izquierda) el polarizador DIC. 3- Con esta configuración ya es posible observar y capturar imágenes en condiciones de luz transmitida normal. 2 Tutorial Zeiss 04
Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph) 1-Observamos las características de Fases que posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan Fases/Ph) . Las características de Fase del Objetivo vienen marcadas en el mismo Objetivo (Ph1=fase 1; Ph2=Fase 2; Ph3=Fase 3) ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web. 1 2-Colocamos la rueda en la misma posición de Fases/Ph que el anillo de Fases marcado en el Objetivo con el que se está trabajando. 3-Retiramos de la vía de luz el polarizador DIC. 2 3 Tutorial Zeiss 04
Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph) 4-Sacamos la Barra DIC/Fases hasta su posición más externa . La barra tiene 2 posiciones: -Interna (para ver en DIC). -Externa (para ver en Contraste de Fases y Fluorescencia). 5-El equipo queda configurado para capturar imágenes en Contraste de Fases. 4 Tutorial Zeiss 04
Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC) 1 2 1-Observamos las características DIC que posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan DIC) . Las características de DIC del Objetivo vienen marcadas en la cuña DIC integrada sobre cada Objetivo (I= DIC I; II=DIC II; III=DIC III) ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web. 2-Para consultar el DIC del objetivo se puede retirar con CUIDADO la cuña y observar el número del DIC grabada en la misma. Tutorial Zeiss 04
Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC) 5 3 4 5-Insertamos la Barra DIC/Fases hasta su posición interna . La barra tiene 2 posiciones: -Interna (para ver en DIC) -Externa (para ver en Contraste de Fases) 6-El equipo queda configurado para ver y capturar en DIC. 3-Colocamos la rueda en el nº DIC marcado en el objetivo con que trabajamos. 4-Introducimos en la vía de luz el Polarizador DIC ( hacia la derecha). Tutorial Zeiss 04
Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia) NORMAS BÁSICAS 1-Encender la lámpara de Fluorescencia . Antes de encender la lámpara de fluorescencia es necesario verificar en el Registro de Uso del equipo que han transcurrido un mínimo de 30 minutos desde la sesión previa ( recordar que existe riesgo de explosión de la lámpara de mercurio (vapores tóxicos) si se enciende en caliente). Para evitar la pérdida/quemado de la fluorescencia de nuestra muestra cada vez que no estemos capturando la imagen es recomendable USAR la “barra/obturador de Fluorescencia”: Introducimos la barra hacia el interior para cerrar la fluorescencia de forma temporal. Todos los microscopios de fluorescencia Zeiss presentan asociado un protector móvil de fluorescencia para el usuario que puede aplicarse/bajarse para evitar la visión directa de la fluorescencia (perjudicial) Tutorial Zeiss 04
Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia) 1 2 2-Para cambiar al filtro de fluorescencia deseado Usamos la botonera inferior lateral derecha : Presenta 3 posiciones/filtros : -Rojo -Verde -Triple -Cyan CFP 1-A diferencia de otros Zeiss(15,16) la rueda de cambio manual de filtros no está accesible (figura 1) y para cambiar los filtros es necesario usar la botonera situada en el lateral derecho. Tutorial Zeiss 04
UTILIDADES DE INTERES Zeiss 04 presenta un Obturador (lateral derecho) que controla la imagen que llega al programa asociado OPENLAB para la captura de imágenes. Tiene 2 posiciones: 1-Hacia afuera la imagen sólo se ve en el programa de captura de imágenes. 2-Hacia adentro permite ver al observador. Tutorial Zeiss 04
UTILIDADES DE INTERES 1 Zeiss 04 está ajustado y automatizado en relación a la posición de la platina para el enfoque de las muestras. MUY IMPORTANTE :antes de apagar el microscopio volver a SUBIR la platina (usando la botonera ) (1) si hemos estado cambiando muestras . NO DEJAR LA PLATINA BAJADA AL APAGAR o se pierde el punto de enfoque y se desconfigura el equipo. Tutorial Zeiss 04
UTILIDADES DE INTERES IMPORTANTE : Zeiss 04 presenta un sistema automatizado de: -Cambio de Objetivos. -Cambio de filtros de fluorescencia. 3 1 2 2 Para CAMBIAR OBJETIVOS es necesario usar la botonera situada en el lateral IZQUIERDO (1) Para CAMBIAR FILTROS FLUORESCENCIA es necesario usar la botonera situada en cualquiera de los laterales (2) Para SUBIR Y BAJAR la platina usamos la botonera situada en el lateral ANTERIOR IZQUIERDO (3). Siempre subir al platina antes de apagar Zeiss 04 para que no se desconfigure el equipo. Tutorial Zeiss 04
Unidad de Microscopía Centro de Investigación del Cáncer Campus Miguel de Unamuno 37007 Salamanca (Spain). Tutorial Zeiss 04