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FICHE 1. LA COLORATION DE GRAM Objectif: réaliser une coloration de gram

Violet de gentiane. Qlcool. FICHE 1. LA COLORATION DE GRAM Objectif: réaliser une coloration de gram. NOM: PRENOM:. MATERIEL PRODUITS -une lame et une lamelle -un pot de yaourt -une anse de platine -une pissette d’eau distillée -un bec bunsen -une pissette d’alcool à 90-95°

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  1. Violet de gentiane Qlcool FICHE 1. LA COLORATION DE GRAM Objectif: réaliser une coloration de gram NOM: PRENOM: MATERIEL PRODUITS -une lame et une lamelle -un pot de yaourt -une anse de platine -une pissette d’eau distillée -un bec bunsen -une pissette d’alcool à 90-95° -Un microscope à immersion -un flacon de violet de gentiane -un flacon de solution de lugol -un flacon de fuschine -papier absorbant -huile à immersion PROTOCOLE: indiquer sur les photographies, les lettres correspondant au étapes décrites 1- Réalisation d’un frottis de yaourt: A- Cette opération se réalise dans la zone stérile d’un bec bunsen. B- Etalement: Avec une anse de platine stérilisée à la flamme du bec, étaler en un film mince et régulier une goutte de yaourt. C- Stériliser l’anse de platine à la flamme du bec D- Séchage du frottis: Laisser sécher la lame en la maintenant dans l’air chaud de la veilleuse du bec bunsen. E- Fixer le frottis: recouvrir la lame d’alcool pendant 5 minutes; le rejeter puis laisser s’évaporer l’alcool résiduel 2- La technique de coloration F-La coloration primaire: Recouvrir de violet de gentiane en versant le colorant en bout de lame et en le faisant glisser le long de la lame. Laisser agir de 30 secondes à 1 minute. Rincer à l'eau déminéralisée pour éliminer l’excédent de colorant. G- La fixation au lugol: Pencher la lame et éliminer le violet de gentiane en faisant couler sur la lame la solution de lugol. Laisser agir 30 secondes. Rincer à l'eau déminéralisée pour éliminer l’excédent de lugol. H-La décoloration à l’alcool: Verser quelques gouttes d’alcool sur le frottis tenu verticalement jusqu’à ce que l’alcool s’écoule non teinté (5 secondes environ). Rincer avec un jet de pissette d’eau déminéralisée. Nettoyer le dessous de la lame à l’alcool puis à l’eau. I-La coloration secondaire: Recolorer par de la fuschine en versant le colorant en bout de lame et en le faisant glisser le long de la lame. Ne pas verser la fuschine sur le frottis pour éviter une coloration trop intense. Laisser agir de 10 secondes à 20 secondes. Rincer avec un jet de pissette d’eau déminéralisée. Laisser sécher. 3- Observation au microscope: déposer une goutte d’huile à immersion sur la préparation et observer le frottis à l’objectif x 100

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