150 likes | 764 Views
ZÁKLADY BARVENÍ. MUDr. Filip Wagner Ústav histologie a embryologie Lékařská fakulta UP v Olomouci. Důvody barvení. preparáty (tkáňové řezy) se zpravidla prohlížejí ve světelném mikroskopu
E N D
ZÁKLADY BARVENÍ MUDr. Filip Wagner Ústav histologie a embryologie Lékařská fakulta UP v Olomouci
Důvody barvení • preparáty (tkáňové řezy) se zpravidla prohlížejí ve světelném mikroskopu • jednotlivé části tkáně (struktury) se liší svou optickou lomivostí jen minimálně, nelze tyto struktury ve světleném mikroskopu prakticky rozeznat • řezy je tedy nutné obarvit vhodnými barvivy (současně využíváme různé afinity různých barviv k jednotlivým tkáním, buňkám a částem buněk • prohlížet nebarvené preparáty je možné jen za určitých podmínek ve speciálních mikroskopech (např. s použitím fázového kontrastu)
Druhy barviv (1) • základní dělení barviv je na zásaditá a kyselá • struktury tkání a buněk se liší podle toho, kterými barvivy se barví, označují se potom jako bazofilní, eosinofilní (oxyfilní) nebo neutrofilní (hetorofilní) O neutrofilii hovoříme u struktur, které se barví jak slabě kyselými (eosinofilními), tak slabě zásaditými (bazofilními) barvivy • bazofilní je např. jaderný chromatin nebo bazofilní granula • eosinofilní je např. vlákno příčně pruhovaného svalu kosterního • neutrofilní jsou např. neutrofilní granula bílých krvinek
Druhy barviv (2) • podle původu se histologická barviva dělí na přirozená a umělá • přirozená barviva jsou extrakty rostlinného nebo živočišného původu (např. šafrán) • barviva umělá (syntetická) jsou látky, které se vyrábějí „chemickou cestou“, patří mezi ně například anilinová barviva
Druhy barvení • barvit lze • za živa (přísně vitální barvení) • po smrti vpravením barviva do čerstvé tkáně (supravitální barvení) • fixované tkáně v řezech nebo in toto (celý blok tkáně vkuse)
PŘEHLEDNÁ BARVENÍ • základní přehledné barvení, které se používá v histologii je barvení hematoxylin – eosinem • další přehledná barvení jsou • Weigert van Gieson • azan • oranž-eozin a toluidinová modř (Dominici) • Massonovy trichromy
Přehledné barveníhematoxylin – eozin • odparafinování (xylen, alkohol, voda) • barvení hematoxylin • barvení eosinem
Zamontování preparátu • hotový histologický preparát se pro prohlížení a k funkci trvalého preparátu montuje do montovacích médií a překryje krycím sklem • běžným montovacím médiem je Entellan, před zamontováním do Entellanu se tkáň odvodní! • existují i s vodou mísitelná montovací média např. Aquatec