Download
1 / 16
170 likes | 425 Views
Průtoková cytometrie základní princip a klinické využití. Brzová Petra. Průtoková cytometrie (flow cytometry). Průtoková cytometrie je moderní laboratorní metoda měření a analýza fyzikálních -chemických vlastností buňky během průchodu laserovým paprskem
E N D
Průtoková cytometriezákladní princip a klinické využití Brzová Petra
Průtoková cytometrie (flow cytometry) • Průtoková cytometrie je moderní laboratorní metoda • měření a analýza fyzikálních -chemických vlastností buňky během průchodu laserovým paprskem • Identifikace různých buněčných typů uvnitř smíšené populace, analýza jednotlivých subpopulací v rámci jedné populace • Rychlá, přesná a reprodukovatelná metoda, umožňuje současné měření několika parametrů až na 100 000 buněk za 1 sekundu
Základní komponenty průtokového cytometru: • 1. Fluidní systém • Flow cell (průtoková komůrka) • Sheat fluid(nosná kapalina ) • Hydrodynamická fokusace
2. Optický systém Laserový paprsek Forward scatter (FSC) Side scatter (SSC) emitované fluorescenční signály Základní komponenty průtokového cytometru:
Imunofenotypizace • typizace jednotlivých buněčných populací za využití reakce antigen-protilátka. • reakce je vizualizována označením protilátky fluorochromem (FITC,PE,PC5)
Základní komponenty průtokového cytometru 3. Počítačový systém (workstation) • Výstupem měření jsou pak výsledky v grafické a číselné formě: • jednoparametrové histogramy • dvouparametrové histogramy • zastoupení buněk nesoucí daný antigen v procentech
Klinické využití průtokové cytometrie • Imunofenotypizace leukemií a lymfomů • DNA analýza • Funkční vyšetření leukocytů • Stanovení intracelulárního vápníku • Diagnostika defektů imunity • Cytometrické vyšetření solidních nádorů • Diagnostika a monitorování autoimunních chorob • Transplantační imunologie
Možnosti využití FCM na našem pracovišti • Vyšetření periferní krve: • Lymfocytóza (odlišení reaktivní a monoklonální lymfocytózy) • Pancytopenie (vyloučení HCL, PNH) • Monoklonální gamapathie • Akutní leukémie (odlišení AML od ALL) • Základní imunologické vyšetření (stanovení početního a procentuálního zastoupení B-ly, T-ly subpopulací, NK-buněk, hodnocení imunoregulačního indexu)
Možnosti využití FCM na našem pracovišti • Vyšetření kostní dřeně: • Podobné indikace jako vyšetření periferní krve • Vyšetření lymfatické uzliny: • Ve většině případu umožňuje rychlou diagnostiku případného postižení lymfomem, odlišení od reaktivní lymfatické uzliny či postižení metastatickým karcinomem, vyšetřujeme vždy v kombinaci s cytologickým vyšetřením otisku LU • Vyšetření výpotků a likvoru: • K vyloučení postižení lymfoproliferativním onemocněním
Základní panely vyšetření na našem pracovišti • Základní panel – vyšetření základních lymfocytárních subpopulací: • B-lymfocyty • T-lymfocyty – helper T-ly a supresorové T-ly • NK- buňky • Stanovení imunoregulačního indexu (CD4/CD8) • Určení zastoupení povrchových imunoglobulinových řetězců kappa/lambda na B-lymfocytech = vyloučení klonálních B-lymfocytů
Základní panely vyšetření na našem pracovišti • Panel B-lymfoproliferací • Při potvrzení monoklonální B-ly populace nebo vysokém podezření na B-lymfoproliferaci • Blíže charakterizuje imunofenotyp klonálních B-lymfocytů • Umožňuje bližší zařazení B-lymfoproliferace • Panel T-lymfoproliferací • Při významné T-lymfocytóze s podezřením na T-lymfoproliferativní onemocnění
Základní panely vyšetření na našem pracovišti • Panel akutních leukémií • U pacientů s podezřením na AL • Rozlíšení základních subtypů AL (ALL, AML) • Bližší charakteristika subtypů AL a zařazení dle FAB klasifikace • Další panely speciálních vyšetření • Mnohočetný myelom • B-CLL • PNH
Způsob odběru a přepravy materiálu k FCM vyšetření • Vyšetření se provádí denně (mimo So, Ne) • Periferní krev – odběr jako KO • Kostní dřeň – speciální zkumavka s antikoagulačním roztokem • LU – odebrána do gázy navlhčené ve FR • Vzorky doručit do laboratoře nejpozděj do 10:00 z důvodu následného zpracování • Dostupnost výsledku vyšetření je do 2 hodin • Výsledek možno zjistit telefonicky na kl. 428
Pracovní postup při imunofenotypizaci průtokovou cytometrií • Stanovení buněčnosti vyšetřované suspenze • Pipetování vzorku • Značení monoklonální protilátkou • Inkubace • Lýza erytrocytů • Promytí • Resuspenze v pufru PBS • Analýza (měření)
