LABORATORIO NACIONAL DE DIAGNÒSTICO VETERINARIO (LNVD)

1. LABORATORIO NACIONAL DE DIAGNÒSTICO VETERINARIO (LNVD) Marcela Antolìnez Dra. Maria Cristina Vásquez Directora Practica Industrial Facultad de Bacteriología y Laboratorio Clínico Universidad de Santander UDES

2. BRUCELOSIS • Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR) • LEUCOSIS BOVINA • Diarrea Viral Bovina DVB • Tuberculosis Bovina TBC

3. BRUCELOSIS Enfermedad zoonótica, intracelular, afecta a diferentes especies de animales domésticos y silvestres. Barreras en comercialización de los animales y sus productos. Altera desarrollo socioeconómico del sector rural más vulnerable. Distribución mundial. Incidencia variable de unas áreas a otras. Algunos países del centro y del norte de Europa han conseguido su erradicación. En Sudamérica y países mediterráneos, (europeos y africanos) la Enf. continúa siendo frecuente.

4. División BXII. Proteobacteria Clase I Alphaproteobacteria Orden I Rhodospirillales Familia II Acetobacteraceae Género I Acetobacter Género IX Gluconobacter Orden II Rickettsiales Familia I Rickettsiaceae Género I Rickettsia Orden VI Rhizobiales Familia I Rhizobiaceae Género I Rhizobium Género II Agrobacterium Familia III Brucellaceae Género I Brucella Brucella spp.

5. POBLACIÒN SUSCEPTIBLE C Consumidores de leche cruda o de subproductos lácteos o cárnicos contaminados con la Brucella. Veterinarios, manejadores de ganado, vacunadores, operarios en matadero. Población infantil rural y urbana marginal Microbiólogos, Bacteriólogos, Auxiliares de laboratorio

6. AGENTE CAUSAL Brucella spp. Gram negativa, Facultativa, Intracelular Capaz de sobrevivir y multiplicarse en las clls del S. RE No móvil, No esporulado, No posee cápsula Variable en su forma (bacilos muy cortos, cocos o cocobacilos, con una longitud de 0.5 a 0.7 u A por 0.5 a 1.5 L Crece lentamente en medios aeróbicos (parcialmente dependiente de tensiones bajas de CO2) Colonias de tipo mucoso T. Op. crecimiento 37 °C, pH entre 6,6 a 7,4. Es catalasa +, Reacciones bioquímicas según cepa sea lisa o rugosa “A pesar de ser considerado un organismo fastidioso por sus requerimientos en el cultivo puede crecer en medios nutritivos mínimos”

7. Brucella ovis Brucella canis Proteínas (porinas) Lipopolisacárido (sLPS) ESPECIES DEL GÉNERO Brucella spp. Brucella melitensis Brucella abortus Especies lisas Brucella maris Brucella suis Brucella neotomae Especies rugosas

8. Brucella melitensis Agente responsable de la mayoría de los casos humanos. Biotipos (1-3) La especie más patógena e invasiva en el humano. Afecta comúnmente a las cabras, pero puede afectar a bovinos y cerdos.

9. Brucella abortus Principal responsable de la brucelosis bovina Ocho biotipos (1-7 y 9) Menor patogenicidad para los humanos. • Afecta principalmente a bovinos, puede afectar a búfalos, alces, jabalíes, zorros, caballos, ciervos, camellos, perros y cerdos.

10. Brucella suis Se subdivide en 4 biotipos (1-4). Afecta principalmente a los cerdos. También puede afectar a loshumanos. • Brucella neotomae Afecta a roedores silvestres “rata del desierto”

11. Brucella ovis Afecta a ovinos. Estos no se infectan fácilmente con B. abortus pero pueden portarla y excretarla 40 meses después de la infección • Brucella canis Afecta a caninos. Su afección en humanos es rara vez reportada.

12. Brucella maris (B. Pinnipediae, B. Cetaceae) no hay reporte de capacidad zoonótica. Ha extendido el rango ecológico

13. TRANSMICIÒN RESERVORIO SALVAJE (liebre, rata, jabalí, venado) RESERVORIO DOMÉSTICO (vaca, búfalo, cabra, cerdo, oveja) Contacto Indirecto Ambiente Contacto Directo LECHE Y DERIVADOS Vía inhalatoria Vía digestiva INGESTIÓN HUMANO

14. PRINCIPAL Y MÁS COMÚN RUTA DE TRANSMISIÓN Se adquiere por contacto con secreciones infectadas producidas durante los abortos o por ingestión de productos cárnicos o lácticos contaminados

15. BRUCELOSIS BOVINA Enfermedad reproductiva caracterizada por aborto, retención de placenta y problemas de fertilidad en el hospedador principal. Transmisión B. abortus en Bovinos VÌA ORAL: al lamer fetos y descargas genitales de abortos partos e ingestión de pastos contaminados. Exposición in utero o cuando terneros nacidos de vacas sanas, son alimentados con calostro o leche de vacas infectadas Excreción bacterias en descarga vaginal hasta 40 días post exposición y pre-aborto. En secreciones, excreción masiva , hasta por 15 días después del aborto. Después de expulsión de membranas fetales el número de microorganismos eliminados disminuye. La descarga cesa 2-3 meses después de la infección. Quedan portadoras que excretan bacterias intermitentemente por muchos años

16. Produce importantes pérdidas económicas: En Colombia se han estimado alrededor de 44.000 millones de pesos/año. En los bovinos, puede cursar asintomática o severa

17. La dosis, raza, edad, sexo, tiempo de gestación, y la resistencia natural a la enfermedad, influencian la evolución de la infección. RESISTENCIA / SUSCEPTIBILIDAD A LA INFECCIÓN Condiciones de supervivencia de Brucella abortus Suelo: frío 48-73 días Agua: 8-37 C 1-57 días Heces: 1-120 días Desperdicios 12C 1-8 meses Concentrado > 100 días Lana: 12 C 110 días

18. DETECCIÒN DE LA INFECCIÒN • Análisis en suero de hembras >18 meses. Machos > 8 meses • Serología para animales en movilización (venta, exportación, ferias, matadero) • Si hay reactores positivos aislar y solo movilizar para matadero. • Tomar medidas conjuntas para su control y prevención entre Propietario y Veterinario.

19. DIAGNÒSTICO ELISA indirecta en suero y leche en bovinos ELISA competitiva Fijación de complemento Rosa de bengala en sueros PCR (tejidos, leches, cultivos) Cultivo y pruebas bioquímicas: Biología molecular: PCR Detección directa ELISAs indirecta y competitiva Fijación de Complemento Rosa de Bengala Detección indirecta

20. BRUCELOSIS HUMANA Síntomas,1 ~ gripe, puede incluir fiebre, sudoración, cefaleas, mialgias artralgias y debilidad física. Los sistemas osteoarticulares son los más afectados, pero en las fases agudas de la enfermedad, el corazón y el sistema nervioso se pueden afectar. También puede causar síntomas crónicos que incluyen fiebres recurrentes, dolores comunes y fatiga Transmisión • Inoculación por cortes o abrasiones de piel en contacto con placenta o secreciones vaginales contaminadas. • A través de conjuntivas. • Inhalación de aerosoles. • Consumo de leche cruda, derivados lácteos no pasteurizados, carne cruda. • Inoculación accidental de la vacuna animal C19. Dosis infectiva 10 a 100 bacterias • Ha sido sugerida la transmisión sexual .

21. BRUCELLAS QUE CAUSAN LA INFECCIÓN EN HUMANOS Brucella melitensis Brucella abortus Brucella suis Brucella canis

22. BRUCELOSIS HUMANA Sin tratamiento, la tasa de letalidad es menor al 2% y por lo común, sucede como consecuencia de la endocarditis. Como la duración de la enfermedad varía desde una pocas semanas a varios meses, se necesitan pruebas de laboratorio para confirmar el diagnóstico clínico.

23. DIAGNÒSTICO EN HUMANOS Cultivo y pruebas bioquímicas: Biología molecular: PCR Detección: Aislamiento Sangre o MO ELISA Competitiva Fijación de Complemento Rosa de Bengala

24. Definición de caso (OMS) Caso Presuntivo:caso compatible con la descripción clínica, vinculado epidemiológicamente a casos presuntos o confirmados en animales o a productos de origen animal contaminados. Caso Probable: caso presunto con resultado positivo en la prueba de Rosa de Bengala. Caso Confirmado: caso presunto o probable que es confirmado en laboratorio por pruebas F.C’ o ELISA

25. TRATAMIENTO La terapia antibiótica óptima está aún en discusión. Debido a la localización intracelular de la Brucella, se requiere la asociación de varios antimicrobianos durante varias semanas.

26. CONTROL Y PREVENCIÓN DE BRUCELOSIS EN HUMANOS Control y eliminación de la infección de los reservorios animales. (Resolución ICA 000119) Exigencia de pasteurización de leche. Métodos diagnósticos sensibles y específicos disponibles

27. CONTROL Y PREVENCIÓN DE BRUCELOSIS EN HUMANOS Prevención en grupos ocupacionales: capacitación, educación continuada, uso de equipo de protección. Vacunas en humanos tienen eficacia limitada. Las vacunas vivas, se asocian con potencial de reactivación de patogenicidad.

28. TÈCNICAS DE DIAGNOSTICO • Cultivo de especimenes para el aislamiento • Cultivo masivo de bacterias para la preparación de reactivos diagnósticos • Amplificación de DNA por PCR Cultivos PCR DIRECTAS • Rosa de Bengala • Fijación de Complemento • Elisa Indirecta • Elisa Competitiva. INDIRECTAS

29. Homogenización e incubación (Antígeno + suero) Positiva: FORMACION DE UNA RED DE AGLUTINACIÓN  ROSA DE BENGALA Antígeno: células completas e inactivadas de Brucella abortus Tinción con el colorante Rosa de Bengala a pH 3 para favorecer la actividad de la IgG1 Anticuerpos anti Brucella abortus presentes en suero Negativa: No Formación de la red de aglutinación.

30. FIJACIÓN DE COMPLEMENTO Antígeno Brucella abortus inactivada Anticuerpos presentes en suero Complemento : factor sérico presente en el suero. Función: lisis del complejo antígeno-anticuerpo. (Fuente: suero de cobayo) Glóbulos Rojos Ovinos (GRO) Hemolisina : anticuerpos anti- GRO

31. GRO+HEM Filas controles (+) 1:10 GRO+HEM+S+C’ (+) 1:20 (-) (+) (-) (-) C+ 1:80 Cantidad mínima de anticuerpos detectados: 200 ng/ml

32. ELISA Indirecta Antígeno : sLPS de Brucella abortus Cultivos PCR Anticuerpos : anti sLPS Brucella abortus en suero (o en leche) Conjugado monoclonal: anticuerpo Anti IgG1 bovina unido a peroxidasa Revelador: Substrato (H2O2)+Cromógeno

33. Cultivos PCR

34. ELISA Competitiva Detecta TODOS los isótopos y ayuda a diferenciar entre animal infectado y animal vacunado en reglamentariamente con C19

35. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) Es causada por un herpesvirus (BHV - 1) Es causa también deVulvovaginitis pustular infecciosa

36. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) Herpesvirus bovino tipo - 1 Se presenta: • Como enfermedad fatal en terneros nonatos no protegidos, interesando una o más superficies de mucosas del tracto respiratorio y gastrointestinal, y menos frecuentemente de otros órganos(hígado, bazo, timo y suprarrenales). • Con formas abortivas al infectar animales preñados no inmunizados. • Como IBR : enfermedad del aparato respiratorio. • Como vulvovaginitis pustular infecciosa: También suele provocar pústulas vulvo vaginales, además de conjuntivitis, enteritis y encefalitis.

37. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) Síntomas: Anorexia, fiebre, abundantes secreciones nasales y oculares. Baja producción Láctea La enfermedad comienza con un estado gripal, con descarga nasales e inflamación de conjuntiva. En adultos se limita a la infección de las vías respiratorias, con complicaciones en los animales preñados. Estas afecciones respiratorias, hace a algunos susceptibles a Pasteurella haemolitica, que causa severas neumonías. Las neumonías por pasteurellas son enfermedades muy frecuentes en “feedlots”, y son las que provocan mayores pérdidas en el mercado de la carne.

38. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) Este virus tiene la característica de mantenerse en el bovino en forma activa, es decir, sin causar enfermedad después de una infección inicial. Pero por problemas de estrés puede reactivarse y ser nuevamente excretado. Hecho que sumado a los numerosos reservorios, mantiene la enfermedad en los rebaños. 

39. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) De no producirse infecciones secundarias, la recuperación es rápida.La presencia de IBR en un rodeo predispone a los animales a la infección por otros virus y bacterias, especialmente de Moraxella bovis (causante de queratoconjuntivitis infecciosa), bacteria oportunista que aprovecha la enfermedad causada por IBR para instalarse en la conjuntiva.

40. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) PATOGÉNESIS: Presenta una amplia variedad de signos clínicos, como consecuencia de la acción del virus sobre los sistemas respiratorio, genital, digestivo y nervioso, por lo que se describen cinco formas de presentación.

41. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) • Respiratoria. • La más importante por su elevada morbilidad. • Fiebre, anorexia, dificultad respiratoria, enrojecimiento de las mucosas nasal es acompañado de secreción, clara al principio y luego mucopurulenta. • En algunos casos, acompañada de conjuntivitis, moderada o severa. • El aborto puede ser elevado en hembras gestantes, acompañando los signos clínicos o hasta tres o cuatro meses después.  Bovino en fase aguda. Secreción nasal cristalina.

42. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) PATOGÉNESIS: Presenta una amplia variedad de signos clínicos, como consecuencia de la acción del virus sobre los sistemas respiratorio, genital, digestivo y nervioso, por lo que se describen cinco formas de presentación.  Genital. Caracterizada por enrojecimiento, adema y presencia de pústulas o úlceras mucopurulentas lentas, tanto en la mucosa de la vulva como del pene. Generalmente no acompañada de aborto. 

43. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) PATOGÉNESIS: Presenta una amplia variedad de signos clínicos, como consecuencia de la acción del virus sobre los sistemas respiratorio, genital, digestivo y nervioso, por lo que se describen cinco formas de presentación.  Ocular: Puede presentarse sola o acompañada de la forma respiratoria. Se observa inflamación y enrojecimiento de la conjuntiva, así como secreción ocular abundante, al principio clara y después mucopurulenta. Puede causar opacidad de la córnea y queratitis. El aborto en algunos casos es elevado. 

44. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) PATOGÉNESIS: Presenta una amplia variedad de signos clínicos, como consecuencia de la acción del virus sobre los sistemas respiratorio, genital, digestivo y nervioso, por lo que se describen cinco formas de presentación.  Nerviosa. Asociada a meningo-encefalitis, mayormente en terneros menores de seis meses, ocasionando ataxia, movimientos frenéticos, salivación profusa, rechinar de dientes, postración y muerte. Digestiva. Afecta terneros de una a tres semanas, causando fiebre, dificultad respiratoria y diarrea, lesiones necróticas de color blanco aparecen en la mucosa del tracto digestivo. La enfermedad evoluciona en forma aguda con alta mortalidad.

45. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) IMPACTO – SALUD PÚBLICA El hecho de que existan informes de la existencia de anticuerpos precipitantes en ciertos individuos puede ser debido a las relaciones antigénicas existentes entre los virus de la familia Herpetoviridae El hombre es refractario de la Enfermedad Podemos decir que la presencia de Acps neutralizantes contra el virus VHB 1 esta limitada a las especies de la familia Bovidae, y familias cercanas como cervidae la susceptibilidad a la rinotraqueitis parece estar limitada al orden de los artiodáctilos con afinidad especial hacia la tribu de los bovinos

46. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) DIAGNÒSTICO La muestra Suero estéril Técnicas Virusneutralización: Prueba de referencia internacional para la cuantificación de anticuerpos. El sistema utiliza virus de referencia y cultivo de células vivas, las cuales son mezcladas con la muestra de suero. (Exigente en la calidad de la prueba). ELISA I: Utiliza antígeno viral pegado en una placa a la que se le incorpora el suero problema y una enzima, para luego ser revelado mediante la incorporación de un sustrato específico. (Esta admite la utilización de todos los sueros). Los resultados del ELISA nos permiten determinar animales positivos o negativos.

47. IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) DIAGNÒSTICO Técnicas Aislamiento viral:En caso de encontrarse ante un cuadro clínico agudo se pueden remitir muestras al laboratorio para iniciar la marcha virológica hisopado de conjuntiva y fosas nasales sangre con anticoagulante (EDTA). Esta muestra es aconsejable ante un cuadro febril (viremia). La muestra De necropsia: tonsilas y ganglios nerviosos periféricos a las lesiones observadas, cerebro y ganglio de gasser, ante síntomas nerviosos, riñón, hígado, bazo y pulmón, sangre para extracción de suero o colectas de los exudados de cavidades, feto con membranas.

48. LEUCOSIS BOVINA • Virus • Puede llegar a infectar a un elevado porcentaje de los bovinos de un establecimiento. Sin embargo sólo un bajo número de ellos, generalmente mayores de tres años, pueden desarrollar síntomas clínicos. • Enfermedad caracterizada por la presencia de tumores (linfosarcoma) y es mortal • Los bovinos infectados que no desarrollan la enfermedad clínica constituyen la principal fuente de contagio de la infección, puesto que son portadores de por vida del virus. Existen algunas evidencias que las vacas infectadas y sin síntomas clínicos de la enfermedad pueden tener una menor producción de leche y una disminución de la respuesta inmunológica a otras enfermedades. Además, es una limitante para la exportación de vacunos y la comercialización de semen y embriones.

49. TRANSMICIÒN LEUCOSIS BOVINA • Horizontal o Vertical : Bovino a Bovino / Madre a Hijo) • Traspaso de glóbulos blancos (linfocitos) infectados con el virus. ( [ ] en sangre) • Se pueden encontrar linfocitos infectados: en secreciones y fluidos biológicos (sangre, leche, calostro, secreción nasal, saliva, semen y orina ) • Riesgo de infección por medio de la realización prácticas como: extracción de sangre, vacunación, castración, descorche, inyección de medicamentos, cirugía, palpación rectal y tatuaje entre otras que se realicen sin respetar las medidas higiénicas. • Los artrópodos hematófagos parásitos de los vacunos (tábanos, mosca brava, etc.) podrían ser otra vía de diseminación de la infección.

50. LEUCOSIS BOVINA