Section 1-1 Special stain ( 특수염색 ) Connective tissue ( 결합조직 , 결체조직 )

1. Section 1-1 Special stain (특수염색) Connective tissue (결합조직, 결체조직)

2. van Gieson’s Collagen fiber stain • 염색원리와 목적 • 교원섬유를 증명하기 위한 염색법으로 산성염료인 picric acid와 acid fuchsin을 혼합한 염색액을 사용하여 교원섬유와 근섬유를 적색과 노란색으로 구분하여 염색하는 가장 간단한 염색법 • picric acid에 의해 조성된 강산성 용액상태에서 교원섬유는 aniline계 염료인 acid fuchsin과 선택적 결합을 하여 적색으로 염색

3. van Gieson’s Collagen fiber stain • 염색원리와 목적 • 혼합액내의 saturated picric acid는 염색액의 pH를 산성으로 조절해 주는 기능과 함께 근섬유 및 세포질의 대조염색으로 사용 • 염색액의 pH가 1.5~3.0 의 산성을 유지해야 하며, picric acid가 포화용액 상태여야 좋은 결과를 얻을 수 있다.

4. van Gieson’s Collagen fiber stain • Method • Deparaffinize (xylene) and hydrate (grade alcohols) • Tap water washing • Weigert Iron hematoxylin solution에서 10 minutes nucleus stain • Tap water 5-6 min washing. • 선명한 암청색이 나타나게 한다. • van Gieson solution에서 3~5 minutes stain • Dehydration • 신속히 시행한다. • Clearing & Mounting

5. van Gieson’s Collagen fiber stain • Results • Collagen ------------ red • Muscle -------------- orange • cornified epithelium ---- orange • Red blood cells -------- orange • Nuclei -------------- black-brown

6. van Gieson’s Collagen fiber stain • 참고 (reference) • 교원섬유는 산성 pH에서 염색이 잘된다. • van Gieson 염색용액 내에 picric acid는 염료이면서 또한 염색용액의 pH를 낮추는 역할을 한다. Picric acid는 반드시 포화용액을 사용하여야 한다.

7. van Gieson’s Collagen fiber stain • 참고 (reference) • 핵염색은 van Gieson 염색용액 의 pH가 산성이므로 Harris hematoxylin 염색용액을 사용하면 염색과정에서 핵이 과탈색 될 수 있으므로 내산성 (산저항성, acid fastness) 인 Weigert hemotoxylin 염색용액을 사용해야 한다.

8. van Gieson’s Collagen fiber stain

9. van Gieson’s Collagen fiber stain Muscle and general cytoplasm is yellow

10. van Gieson’s Collagen fiber stain

11. van Gieson’s Collagen fiber stain

12. van Gieson’s Collagen fiber stain

13. van Gieson’s Collagen fiber stain

14. van Gieson’s Collagen fiber stain

15. Masson Trichrome stain for Collagen fiber • 염색원리와 목적 • Purpose • Routine stain for liver and kidney biopsies. • 이 염색의 목적은 van Gieson 염색과 같으나 교원섬유와 세포 간 섬유와 구별이 좀 더 용이하며 신사구체의 혈관 중 막세포 (혈관사이세포, mesangial cell)가 염색되어 그 증식여부를 알 수 있기 때문에 임상적으로 많이 선호하는 염색법 • Azan 염색에 비해 염색이 빠르며 핵의 염색 상태가 좋아 얻어지는 정보량이 많다.

16. Masson Trichrome stain for Collagen fiber • 염색원리와 목적 • Principle • Trichrome 이란 용어는 three color, 즉 3가지 염료를 사용한 염색방법을 말하며 그 중 하나는 핵염색제이다. • 염색원리는 조직 구조내의 세공과 염료 분자의 크기의 차이와 염료 투과성의 차이가 있음에 착안한 경험적 방법 • Formalin에 고정된 조직절편의 경우 염색 전에 Bouin solution으로 매염하여야 좋은 결과를 얻을 수 있다.

17. Masson Trichrome stain for Collagen fiber • 염색원리와 목적 • Principle • 대부분의 아교섬유를 증명하기 위한 염색은 산 처리과정이 많은 관계로 일반염색에 쓰이는 alum mordant hematoxylin을 사용할 경우 순차적으로 탈색되므로 내산성이 있는 Weigert iron hematoxylin을 주로 사용 • 먼저 핵을 염색한 후 biebrich scarlet (가장 작은 염료분자 – 세포질 염색)과 acid fuchsin (중간 크기의 염료분자 – 근섬유 염색)을 혼합한 염색용액으로 조직전체를 염색하면 교원섬유와 근섬유, 세포질 모두 적색으로 염색

18. Masson Trichrome stain for Collagen fiber • 염색원리와 목적 • Principle • 다음 단계로 phosphomolybdic acid나 phosphotungstic acid 와 같은 금속염으로 처리하면 교원섬유에 결합된 분자량이 작은 biebrich scarlet 염료들을 밀어내고 금속염이 교원섬유에 결합되어 (-) 전하를 제공하여 소성 결체조직인 교원섬유만 탈색시키면서 매염준비가 이루어진다.

19. Masson Trichrome stain for Collagen fiber • 염색원리와 목적 • Principle • 그 후 산성 pH에서 (+)로 하전되는 aniline blue 염색액으로 교원섬유를 염색하면 phosphomolybdic acid나 phosphotungstic acid가 aniline blue 염료가 결합하여 교원섬유가 청색으로 염색되고, 비 결합 aniline 염료는 묽은 초산으로 제거한다. • Aniline blue 대신 light green을 사용하기도 한다.

20. Masson Trichrome stain for Collagen fiber • Results • Collagen ------------------ blue • Basement membrane, glomerular tuft -------------------------- blue • Nuclei -------------------- black-blue • Cytoplsm, keratin ------------ red • muscle fibers --------------- red • muscle fibers, intracellular fibers - red • RBC ----------------------- red

21. Masson Trichrome stain for Collagen fiber • 참고 (reference) • 교원섬유의 선택성을 증가시켜주기 위하여 모든 시약이 산성 pH를 유지해야 한다. • 염색전에 Bouin 고정용액으로 매염처리하면 교원섬유와 근섬유의 염색결과가 밝고 선명하게 나타난다. • Aniline blue 용액의염색시간은 장기, 증례, 절편의 두께에 따라 달라지므로 각 경우마다 경검하면서 조절한다.

22. Masson Trichrome stain for Collagen fiber • 참고 (reference) • Aniline blue 염색 후 1% aceticacid로 헹구어 경검하여 염색성이 약하면 다시 aniline blue 용액으로 염색한다. • 1% aceticacid 처리에서 청색과 적색의 균형이 이루어지기 때문에 주의해야 한다. 처리가 너무 길면 청색이 약해진다.

23. Masson Trichrome stain for Collagen fiber Masson's trichrome stain, X400 kidney bx trichrome 10x

24. Masson Trichrome stain for Collagen fiber Masson's trichrome stain showing slight mesangial prominance (magnification x200) Masson's trichrome stain, X400

25. Masson Trichrome stain for Collagen fiber Progression of fibrosis in viral hepatitis. Photomicrographs (original magnification, ×40; trichrome stains) of histologic sections from liver biopsy specimens Cirrhosis of Alcoholic Liver Disease

26. Masson Trichrome stain for Collagen fiber Trichrome stained liver showing fibrous tissue. Collagen is the fibrous tissue are stained Blue (with aniline blue). Trichrome stain showing cirrhotic liver. The normal architecture of the liver is destroyed in this disease and the liver shows nodules surrounded by fibrous bands.

27. Masson Trichrome stain for Collagen fiber

28. Masson Trichrome stain for Collagen fiber

29. Masson Trichrome stain for Collagen fiber

30. Masson Trichrome stain for Collagen fiber

31. Masson Trichrome stain for Collagen fiber