APLICACION DE LA CITOMETRIA DE FLUJO EN EL ESTUDIO DEL SEDIMENTO URINARIO

1. APLICACION DE LA CITOMETRIA DE FLUJO EN EL ESTUDIO DEL SEDIMENTO URINARIO Torres, María Gabriela Noviembre 2011 Residente de 2° Año CEMIC

2. INTRODUCCION • Es una de las pruebas más solicitadas al laboratorio • Detección y seguimiento de trastornos renales vías urinarias, enfermedades metabólicas o sistémicas • Incluye análisis físico, químico y observación al microscopio

3. METODOS PARA ANALIZAR EL SEDIMENTO URINARIO • METODO TRADICIONAL O MANUAL • METODOS AUTOMATIZADOS

4. ANALISIS DEL SEDIMENTO URINARIO CON EL METODO TRADICIONAL • La orina se recoge en un recipiente limpio • Examinarse dentro de las primeras 2 horas de haberse realizado la micción o conservarse de 2°a 8°c si esto no fuese posible • Recolección : • Micción espontánea • Chorro medio • Punción suprapúbica • Punción por sonda

5. ANALISIS DEL SEDIMENTO URINARIO CON EL METODO TRADICIONAL • Análisis físico : • Color • Aspecto • Análisis químico : • Ph • Densidad • Proteínas • Glucosa y cuerpos cetónicos • Urobilinógeno y bilirrubina • Nitritos • Hemoglobina libre

6. ANALISIS DEL SEDIMENTO URINARIO CON EL METODO TRADICIONAL Volumen : 10,12 ml o 15 ml 2000 rpm por 5´ 1 ml sedimento GP16-A2 de CLSI

7. ANALISIS DEL SEDIMENTO URINARIO CON EL METODO TRADICIONAL • Examen directo al microscopio : • Eritrocitos : isomórficos dismórficos • Glóbulos blancos • Células • Cilindros • Cristales • Espermatozoides • Mucus • Contaminantes Microscopia de contraste de fase

8. METODO TRADICIONAL VENTAJAS • Universalización de su uso • Accesibilidad en cualquier tipo de laboratorio • Bajo costo • Operador dependiente • Estandarización del método lo que complica la trazabilidad de los resultados DESVENTAJAS

9. ¿POR QUE ESTANDARIZAR EL METODO TRADICIONAL ? • Porque pretende eliminar causas de variación como: • Tiempo y velocidad de centrifugación • Decantación, volumen de orina y sedimento • Superficie de conteo • Microscopia e interpretación del personal GP16-A2 CLSI

10. METODO AUTOMATIZADO

11. METODO AUTOMATIZADO • Condiciones pre analíticas idénticas al método tradicional • Análisis químico: • Equipo automatizado Urisys que analiza la orina con tiras reactivas • Las muestras se colocan en tubos para orina sin centrifugar

12. METODO AUTOMATIZADO CITOMETRO DE FLUJO UF- 1000i

13. FUNCIONES DEL CITOMETRO DE FLUJO • Conteo y clasificación : - impedancia - óptica • Clasifica y cuenta los 5 elementos formes como : • RBC (glóbulos rojos) • WBC (leucocitos) • EC (células epiteliales) • CAST (cilindros) • BACT (bacterias)

14. DETECTA Y NO CUENTA: -X´TAL: cristales que no son uratos ni fosfatos amorfos -YLC: levaduras - SRC: células redondas - PATH CAST: cilindros no hialinos - MUCUS - SPERM: espermatozoides

15. MUESTRA NORMAL DISPERSOGRAMAS PARAMETROS REPORTABLES INFORMACION DE ALARMAS

16. GRAFICOS DE DISPERSION CITOMETRO DE FLUJO

18. DISPERSOGRAMAS

19. DISPERSOGRAMAS

20. DISPERSOGRAMAS

21. MUESTRA PATOLOGICA PARAMETROS EN INVESTIGACION

22. CRITERIOS DE ALARMA DE EL CITOMETRO DE FLUJO • Establecidas por el fabricante • Establecidas por el usuario

23. CRITERIOS DE ALARMAS ESTABLECIDAS POR EL FABRICANTE

24. CRITERIOS DE ALARMAS ESTABLECIDAS POR EL USUARIO Se colocan en función de las necesidades del usuario

25. VALORES DE REFERENCIA

26. Se utilizaron 30 muestras de pacientes con sedimento urinario normal • La verificación se llevo a cabo siguiendo normas de guías CLSI: C28-A2 CRITERIO DE ACEPTABILIDAD: LOS RESULTADOS DE NUESTROS 30 PACIENTES DEBEN CAER DENTRO DEL RANGO DE REFERENCIA PROPUESTO POR EL FABRICANTE ACEPTANDO SOLO QUE 3 RESULTADOS CAIGAN FUERA DE DICHO INTERVALO

27. HISTOGRAMAS DE INTERVALOS DE REFERENCIA CELULAS EPITELIALES BACTERIAS 3,3% 0,0%

28. HISTOGRAMAS DE INTERVALOS DE REFERENCIA CILINDROS HIALINOS GLOBULOS ROJOS 3,3% 6,7%

29. HISTOGRAMAS DE INTERVALOS DE REFERENCIA GLOBULOS BLANCOS 0,0%

30. SE VERIFICA QUE NUESTRO LABORATORIO PUEDE UTILIZAR LOS VALORES DE REFERENCIA PROPUESTOS POR EL FABRICANTE

31. VERIFICACIONES ANALITICAS

32. ESPECIFICACIONES ANALITICAS

33. LINEALIDAD SE VERIFICO LA LINEALIDAD SEGÚN LA GUIA CLSI :EP6 A

34. LINEALIDAD BACTERIAS

35. LINEALIDAD HEMATIES

36. REPRODUCIBILIDAD

37. REPRODUCIBILIDAD

38. COMPARACION DE METODOS UF-1000i vs MICROSCOPIA EP12-A2 CLSI

39. TABLAS DE CONTINGENCIA CELULAS EPITELIALES CILINDROS HIALINOS

40. TABLAS DE CONTINGENCIA ERITROCITOS GLOBULOS BLANCOS

41. METODO AUTOMATIZADO VENTAJAS • Permite optimizar el tiempo • Mejorar el rendimiento laboral • Disminuir la subjetividad en la interpretación • Las muestras no requieren centrifugación • Alto valor predictivo negativo • Alto costo • Las muestras turbias se deben analizar por el método tradicional DESVENTAJAS

42. TRA: EMERGENCIAS, AMBULATORIOS E INTERNADOS

43. CANAL ESPECIFICO PARA BACTERIAS Reactivos específicos para bacterias permiten detectarlas y cuantificarlas -Solución colorante -Solución diluyente Utiliza dos soluciones

44. POSIBLES ESTRATEGIAS DE APLICACION • Disminuir cultivos en bacteriología 308 muestras 10 bacterias/ul S: 100 % LAS MUESTRAS POR DEBAJO DE ESE PUNTO DE CORTE TUVIERON CULTIVO NEGATIVO PODRIAN HABER EVITADO SEMBRAR 25% DE LAS MUESTRAS

45. POSIBLES ESTRATEGIAS DE APLICACION • Análisis de líquidos de punción Clínica Chimica Acta 392 (2008) 30–33

46. CONCLUSIONES • El equipo responde a todas las especificaciones propuestas por el fabricante, siendo útil clínicamente El uso de sistema automatizado permite: • Disminuir la carga de trabajo del laboratorio • Acelerar tiempos de respuesta en la entrega de resultados • Disminuir errores humanos

47. CONCLUSIONES • No es posible eliminar la lectura microscópica de forma absoluta • Estandarizar condiciones pre-analíticas

48. AGRADECIMIENTOS • Dra. Viviana Correa • Dra. Natalia Dolcemascolo • Dr. Alfredo Martínez • Dra. Vanesa Romano • Dra. Laura Guerrero A mis compañeros de residencia

49. MUCHAS GRACIAS

50. BIBLIOGRAFIA • J.R Delanghe et al. Clinica Chimica Acta 301(2000) 1-18.The role of automated urine particle flow cytometry in clinical practice . • El sedimento urinario :¿Qué hay de nuevo en algo tan viejo? Fernando Dalet. • Comparación del citómetro UF-100i con el sistema Kova y el método convencional para el conteo de leucocitos y eritrocitos en orina. Gómez-Gaviño. • Inconvenientes del método manual para la lectura de sedimento urinario. Jiménez-López • N.E. Nanos, J.R Delanghe/Clinica Chimica 392 (2008)30-33. Evaluation of Sysmex UF-1000i for use in cerebroespinal fluid analysis. • Evaluation of the Sysmex UF-1000i Urine Analyzer as a Screening Test to Reduce the Need for Urine Cultures for Urinary Tract Infection. Xiaozhou Hu, MS, Jie Zhang, MD, Xiaowei Zhang, BS (Department of Laboratory Medicine, Peking University, Third Hospital, Beijing, People’s Republic of China)