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ROL DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

ROL DE LA CITOMETRIA DE FLUJO. LEUCEMIAS AGUDAS LABORATORIO CENTRAL DE REDES Y PROGRAMAS DE CORRIENTES Bioq. Emiliano Sotelo RodrÍguez. Herramientas para el diagnóstico de las Leucemias Agudas. Morfología Citoquímica Citometria de flujo Biología Molecular Citogenética.

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ROL DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

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  1. ROL DE LA CITOMETRIA DE FLUJO LEUCEMIAS AGUDAS LABORATORIO CENTRAL DE REDES Y PROGRAMAS DE CORRIENTES Bioq. Emiliano Sotelo RodrÍguez

  2. Herramientas para el diagnóstico de las Leucemias Agudas • Morfología • Citoquímica • Citometria de flujo • Biología Molecular • Citogenética

  3. Introducción a la Citometría de Flujo • Tecnicaquepermitemedir y analizarcaracterísticasfísicas de laspartículas • Anticuerposmonoclonalesconjugados con fluorocromospermitendeterminarmarcadoresfenotípicos • Identificación de poblacionescelulares

  4. FACSDiva (BD)

  5. Citómetro de Flujo SSC (granularidad) Señales detectadas por detectores convertidas en señal electrónica FL1 Láser FSC (tamaño) FL2 Procesadas por un software FL3 FL4

  6. MORFOLOGIA Y CITOMETRIA

  7. Tipos de muestra • MEDULA OSEA (1 a 3ml EDTA O HEPARINA, a temp amb). • SANGRE PERIFERICA(EDTA O HEPARINA, A TEMP AMB). • BIOPSIAS DE GANGLIOS( 0,5 a 1 g en solucion fisiologica esteril, 4 C hasta llegar al laboratorio)

  8. Tejidos y material de PAAF • LCR (Punción lumbar) • Testículo (PAAF-Biopsia) • Ganglio • Líquido pleural, peritoneal, pericardio • Orina

  9. Técnica estándar de marcación de Ags. de superficie con anticuerpos monoclonales Incubación 15´ T°amb oscuridad Lavados Resuspender Lisante CD19 CD10 CD20 CD13 HLA Dr CD34 Muestra Anticuerpos Monoclonales Adquisición

  10. Diseño del panel de anticuerpos • amplio, identificar células normales y patológicas. • porcentaje, línea, estadío, patrones fenotípicos, patrones aberrantes. • exclusión células muertas.

  11. Alteraciones fenotipicas en leucemias agudas - Alteraciones del patrón de luz (FSC vs SSC, SSC vs CD45) - Asincronismos (ej. CD34+, CD20+) - Fenotipos aberrantes de línea (ej. CD19+CD15+) - Sobreexpresión antigénica - Ausencia de antígenos

  12. Inmunofenotipificación Pautas para diagnosticar Leucemia Aguda - Definir linaje celular de los blastos - linfoide (B,T) - mieloide - mixto - Establecer estadío de maduración

  13. Linaje T Linaje mieloide Puntos Linaje B cCD79a cCD3 aMPO 2 cIgM TCR 2 cCD22 TCR 2 CD19 CD2 CD13 1 CD20 CD5 CD33 1 CD10 CD8 CD117 1 Tdt Tdt CD14 0.5 CD7 CD15 0.5 CD1a CD64 0.5 Sistema de puntuación del EGIL Para asignar un linaje determinado a los blastos, el score debe ser >2 Una LA se define como bifenotípica si el puntaje resulta >2 para más de un linaje

  14. Pautas para asignación de linaje WHO’08 • Linaje B:CD19 int+ [al menos 1 (+)]: cCD79a, cCD22, CD10 intCD19 tenue+ [al menos 2 (+)]: cCD79a, cCD22, CD10 int • Linaje T: cCD3 o sCD3 • Linaje Mieloide:MPO Dif. Monocítica : al menos 2 marcadores (+): CD11c, CD14, CD36,CD64, etc.

  15. LLA de precursor B: cCD22+, cCD79a+, CD19+, HLA-DR+ Pro B: CD10 - Común: CD10+, cad  - Pre B: CD10+/-, cad  +, Ig Sup - B madura: CD10+/-, Ig Sup+ (  ó )

  16. LLA de linaje T cCD3+, CD7+, TCR+/-, HLA-DR- Pro T: CD2 -, CD5 - , CD8 - Pre T: CD2+,y/o CD5+ y/o CD8+ Intermedia: CD1a+,CD4+/CD8+,CD3 sup+/- T madura: CD1a-, CD3+ sup , TCR /

  17. Leucemias Mieloides Agudas

  18. Leucemias Mieloides Agudas

  19. Leucemias Mieloides Agudas

  20. Leucemias Mieloides Agudas

  21. Leucemia Mieloide Aguda Panel de Marcación Marcadores mieloides: aMPO, CD13, CD33, CD117, CD15 Predominantemente Monocíticos: CD14, CD64 Megacariocíticos: CD41, CD42a, CD61 Otros: HLA DR, Tdt, CD34

  22. CASO CLINICO 1 • Paciente de 7 años. • Antecedentes: decaimiento, astenia de 2 meses de evolución, bicitopenia. • Adenopatias cervicales bilaterales, palidez mucocutanea • Laboratorio: Hto: 28%, Gblancos: 25000, Plaquetas: 57000, • PAMO: 97% blastos.

  23. FENOTIPO COMPATIBLE CON LLA-B PREB

  24. CASO CLINICO 2 • Paciente de 25 años. • Consulta por disnea y dolor toraxico. • Rx: ensanchamiento mediastinal y derrame pleural. • TAC de torax, abdomen y pelvis: gran masa mediastinal • Laboratorio: GB:16000/mm3, LDH:1500. • PAMO: 90 % blastos atipicos

  25. FENOTIPO COMPATIBLE CON LLA-T cortical

  26. CASO CLINICO 3 • Hombre de 55 años. Ingresa con cuadro anemico. No tiene antecedente de hemorragia, fiebre ni enferm infetologica. Es derivado a Hosp. de cabecera. • Examen fisico: palidez, sin organomegalia ni adenopatias. • SP: Hto 15%, Hb: 4.8. Plaq: 10000. Morfologia 56 % de blastos. • Se realiza PAMO : 90% blastos atipicos.

  27. FENOTIPO COMPATIBLE CON LMA CON MADURACION MONOCITICA

  28. GRACIAS POR SU ATENCION Servicio de Citometrìa de flujo-OncoHematologìa. Laboratorio Central de Redes y Programas de Corrientes.

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