1 / 28

Detektion af HIV med hhv. ELISA og GPAT (gelatin partikel agglutinations test)

Detektion af HIV med hhv. ELISA og GPAT (gelatin partikel agglutinations test). Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH. Disposition:. Teori: Retrovirus/Lentivirus ELISA GPAT Materiale/Metode: Kriterier Gennemgang af PubMed søgning

angelo
Download Presentation

Detektion af HIV med hhv. ELISA og GPAT (gelatin partikel agglutinations test)

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Detektion af HIV med hhv. ELISA og GPAT (gelatin partikel agglutinations test) Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  2. Disposition: Teori: Retrovirus/Lentivirus ELISA GPAT Materiale/Metode: Kriterier Gennemgang af PubMed søgning Præsentation af artikler Resultater: Resultatskema Diskussion: Konklusion: Statistik i Danmark: Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  3. Problemformulering: ”Hvilken af de to følgende tests, gelatin partikel agglutinationstest (GPAT) eller ELISA, opnår den højeste specificitet, sensitivitet og er mest økonomisk til at påvise HIV antistoffer i blodet?" Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  4. Teori Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  5. HIV-familie: (Human Immunodeficiency Virus) • Retrovirus (-viridae): • RNA-virus. • Danner revers transcriptase. • RNA  DNA. • Enzym integrase. • DNA integreres i cellens eget DNA. • Produktion af nye viruspartikler. • ”Skjuler” sig for immunforsvaret. http://www.bioquest.org/bedrock/ problem_spaces/hiv/ Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  6. HIV-art: • Lentivirus: • Gruppe af såkaldt kompleks retrovirus. • Effektivt til at inficere: • Ikke-delende celler • Delende celler. • HIV udvikler sig hurtigt: • Ved at mutere og derved ændre udseende Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  7. ELISA:(Enzym-Linked Immunosorbent Assay) • Bruges til påvisning af antistoffer. • Efter 3 måneder • Påviser anti-p24 • Direkte sandwich • Coatning af brønd med primært antistof. • Blokering. • Prøve tilsættes. • Antistofkonjugat tilsættes. • Substrat tilsættes. • Reaktion stop. • Absorbans måles. http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/ BiologyPages/E/Elisa.html Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  8. GPAT: Binding mellem antigener og antistoffer. Bindes til en partikel (latex). Specifikke antigen-antistofbindinger. Styrken af bindingerne og hastigheden afh. mængden af antistof. Foretages manuelt. Der kan foretages en rensning af serum. Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  9. Materiale og metode Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  10. Materiale og metoder: • Søgemaskiner: • PubMed • SweMed+ • EMBASE • Web of Science • Blackwell Synergy • Scirus • Google scholar • Kriterier: • Maksimalt 10 år gamle • Metodesammenligning mellem GPAT og ELISA eller anden metode • Søgning foretaget to gange • Søgte efter citerende artikler Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  11. PMID: 14562593Titel: Validation of a simple …Forfatter: Mashange et al, 2003 Søgeord: ”HIV and ELISA”Resultater: 2406 poster, 72 reviews.Handling: Max 10 år gamle. Søgeord: ”HIV and ELISA and GPAT”Resultater: 1 post.Handling: Max 10 år gamle. Eks. på søgning i PubMed: Søgeord: ”HIV”Resultater: 109270 poster, 14184 reviews.Handling: Max 10 år gamle. Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  12. Hele søgningen i PubMed: Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  13. Præsentation af artikler: • Metode sammenligninger: • Mashange et al: GPAT vs. ELISA • Poljak et al: GPAT vs. EIA og Western Blot • Huang et al: GPAT vs. ELISA og Western Blot • Hong et al: Fortynding af GPAT vs. ufortyndet GPAT Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  14. Præsentation af artikler: • Andre artikler: • Frank et al: HIV-hjemmetest i USA. • Goodstein, J: HIV-hjemmetest i Danmark. Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  15. Resultater Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  16. Metode: Mashange et al: Partiklerne er coatede med HIV-1 Ag 5 ml blod opsamles Prøverne blandes Aflæses dagen efter Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  17. Metode: Poljak et al: • 3 forskellige coatninger • Prøverne tilblandes partiklerne i 3 brønde • Aflæses efter 2 timer Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  18. Metode: Huang et al: • Partiklerne er coatede med HIV-1 Ag • Tilsæt 20 µl af prøve • Fortynd 2-fold • Aflæses efter 2 timer Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  19. Metode: Hong et al: • Modificering (S/LS) • Forskellige fortyndinger anvendt • Partiklerne coatede med HIV-1 Ag • Forskellige kriterier for hvert forsøg • Kontrol på positive prøver • Aflæses efter 6-48 timer Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  20. Resultater: Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  21. Diskussion Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  22. Poljak et al vs. Mashange et al: Hvorfor mindre usikkerhed på Poljak et al resultater i forholdet i Mashange et al? Antal prøver Poljak et al 3311 Antal prøver Mashange et al 379 Poljak et al 1 falsk positivt resultat Mashange et al 2 falsk positive resultater Poljak et al specificitet 99,97 % Mashange et al specificitet 99,2 % Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  23. Huang et al vs. Poljak et al: • Forskellen mellem Huang et al vs. Poljak et al: • Huang et al fik i GPAT 10 falsk positive resultater • Poljak et al kun 1 falsk positivt resultat • Årsagen er ulemper ved GPAT • Huang et al specificitet 95,0 % i GPAT (antal prøver 565) • Poljak et al specificitet 99,97 % i GPAT (antal prøver 3311) Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  24. Huang et al vs. Poljak et al: • Huang et al fik i GPAT 1 falsk negativt resultat • Poljak et al fik 0 falsk negative resultater • Årsagen er ulemper ved GPAT • Huang et al sensitivitet 99,5 % GPAT • Poljak et al sensitivitet 100 % GPAT • Huang et al specificitet 21,6 % i ELISA • Høj-risiko gruppen • Årsagen kan være ELISA’s affinitet Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  25. Mashange et al vs. Huang et al: • Forskellen i Mashange et al og Huang et al resultater skyldes de tidligere nævnte årsager: • Antal prøver (Mashange 379, Huang 565) • Falsk positive og falsk negative resultater Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  26. Konklusion: GPAT er ligeså sensitiv som ELISA. Vi kan ikke sige om GPAT er ligeså specifik som ELISA. GPAT er billigere end ELISA. Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  27. Statistik i Danmark: • Pris for ELISA: ca. 150.000 prøver gange ca. 300 kr. = 45.000.000 kr. • Pris for GPAT: ca. 150.000 prøver gange ca. 20 kr. = 3.000.000 kr. Besparelse ved GPAT: 42.000.000 kr. www.ssi.dk Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

  28. Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

More Related