Szabadgyökös reakciók tanulmányozása antioxidáns készítményekkel kezelt patkányok heréjében in vitro 60 Co γ sugárzás

1. Szabadgyökös reakciók tanulmányozása antioxidáns készítményekkel kezelt patkányok heréjében in vitro 60Co γ sugárzás hatására Sárdy Márta1, Váli László2, Drahos Ágnes1, Dám Annamária1, Fébel Hedvig3, Székely Edit2, Blázovics Anna2 1Fodor József OKK-OSSKI, Budapest, 2Semmelweis Egyetem, Budapest, 3Állattenyésztési és Takarmányozási Kutatóintézet, Herceghalom

2. Bizonyos élethelyzetekben az ischaemia/reperfúziós károsodásokat követően sugárterhelés is éri a szervezetet. Keveset tudunk arról, hogy ilyen esetekben alkalmazott antioxidáns vegyületek hogyan hatnak távoli szervekfunkcióira.

3. T. Gerwig, 2002

4. Célkitűzés Kutatásaink során arra voltunk kíváncsiak, hogy a máj-ischaemia/reperfúziós károsodások kivédésére alkalmazott antioxidáns vegyületek hogyan befolyásolják a here redox-homeosztázisát. Van-e különbség a szintetikus Metadoxin és a természetes eredetű Flavonax 100 készítmény hatása között, ha a hereszövetet in vitro Co60 gamma sugárral kezeljük?

5. Ismert például, hogy az androgén-független prosztatatumor, amely rezisztens a jelenleg alkalmazott terápiákra, gátolható A-vitamin, illetve szintetikus retinoid-kezelésekkel, melyek apoptózist indukálnak in vitro a rákos sejtekben. Néhány retinoid-származék hatásos apoptózis-induktor (retinoid-receptor független úton) mind a hormon-, mind a hormontól független prosztatatumor esetén. A TR3 orphan receptor azonban fontos szerepet játszik a drog-indukált prosztata-apoptózis szabályozásában (ZhangXK 2002). Az A-vitamin fontos szerepet játszik a szerin/treonin kinázok aktiválásában Az A-vitamin a RAF proto-onkogén proteinkináz „Zn-finger”doménjére hat, ezáltal befolyásolja a redox-homeosztázist (Hoyos 2005).

6. Flavonax 100 (Fitokup Kft.) polifenolok, flavonoidok, antociánok, proantocianidinek, karotinoidok A-vitamin C-vitamin E-vitamin

7. Az utóbbi évek kutatási igazolták, hogy az A-,C- és E-vitaminok, illetve a polifenolos vegyületek hatnak a jelátviteli utakra, ezáltal befolyásolják a sejtek életműködését, proliferációját és az apoptózist (Azzi 2004,Lunec 2001, Griffiths2001),

8. Metadoxin (Kéri Pharma) Metadoxin (piridoxin L-2-pirrolidon-5-karboxilát) -a piridoxin és a pirrolidon-karboxilát, a glutaminsav ciklikus laktámjának, a glutation szintéziséért és lebontásáért felelős gamma-glutamil ciklus intermedierjének a kombinációja- Antioxidáns tulajdonságának magyarázata lehet, hogy a szövetekben az ionpárból álló molekula feltételezhetően disszociál, és N-oxid típusú molekulák keletkeznek belőle, melyek szerkezetüket tekintve spincsapdaként működhetnek, így szinglet oxigén, hidroxilgyök, illetve szuperoxid anion scavengelésére képesek.

9. A molekula két alegysége önmagában is előfordul a természetben, ezért terápiás koncentrációban toxicitásukkal nem kell számolnunk. A gyógyszer B6 vitamin komponense a szervezetben fontos szerpet tölt be: például az aminosavak, szénhidrátok, szfingolipidek és a hem metabolizmusában. A taurin szintézisén keresztül az epesavak neutralizációjában és detoxikálásában is szerepet játszik.

10. Műtéti protokoll Hím Wistar patkányokat (200-250 g) Nembutal narkózisban (35 mg /ttkg) operáltuk. A bal laterális és a mediális lebenyeket lekötöttük, ezzel 45 percig ischaemiás állapotot idéztünk elő. Ezután az eredeti állapot visszaállítottuk. A kísérletet 24 órával később az állatok elaltatásával termináltuk.

11. Kísérleti protokoll (I.) Antioxidáns kezelések Flavonax 100: 1 g/ttkg per os 10 napig Metadoxin: 200 mg/ttkg/nap ip. 5 napig

12. Kísérleti protokoll (II.) Besugárzás: 6 Gy (0,2586 Gy/min) Gammatron-3 készülékben (60Co γ sugárzás) in vitro testis homogenátum

13. Kísérleti protokoll (III.) • Csoportok (N=10): • kontroll, • áloperált, • ischemia-reperfúzió, • Flavonax-kezelt csoportok, • Metadoxin-kezelt csoportok, Minden csoportban besugárzás

14. Mintaelőkészítés, mérés Here homogenizátum készítése izotóniás KCl oldattal Centrifugálás 4 °C-on 13000 rpm, 20 min. Felülúszóból fehérje meghatározása Lowry módszerével SOD-meghatározás RANSOD kittel (NP-40 lízis pufferben) Szabadgyökfogó-kapacitás meghatározása lumineszcencia méréssel

21. Következtetések Az antioxidáns kezelések máj ischaemia-reperfusio során csak jelentéktelen mértékű eltérést okoztak a herében, viszont sugárterhelés hatására a Metadoxinnal kezelt állatok heréjében szignifikánsan felerősödtek a szabadgyökös reakciók. A Flavononax 100 készítmény mellett nem tapasztaltunk gyökgenerálást.

22. Ezek az eredmények felhívják a figyelmet arra, hogy májműtétek előtt prevenciós céllal alkalmazott antioxidánsok különböző mértékben interferálhatnak a szükséges sugárkezelés kapcsán fellépő károsodásokkal távoli szövetekben is.

23. Köszönetnyilvánítás • Bárkovits Sarolta • Pintér Edina • Szabó Katalin • A kutatásokat a NKFP 1B/047 támogatta.

24. Köszönöm figyelmüket!