Sociedad de Cardiología de Neuquén

1. Sociedad de Cardiología de Neuquén Federación Argentina de Cardiología Chagas Vía Oral Neuquén 29-10-10 Dr. Enrique Bavio

2. 1) Tripomastigotemetacíclico:( al final del ciclo) 2)Amastigote ( flagelo mínimo) 3) Tripomastigotes sanguíneos. ( Slender-delgados, que penetran células del paciente y Stumpy redondeados,que en el vector se transforman en epimastigotes) 4) Epimastigotes. En la porción inicial del tubo digestivo del vector pasaran luego a ser Tripomastigotes y Tripomastigotes metacíclicos. Sociedad de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio Neuquén 29-10-10. 1)Porción terminal del tubo digestivo del vector. 2) En células nucleadas del hospedador próximas a la vía de ingreso donde se reproducen y lejos de la vía de entrada. 3) Amastigotes salen de las células nucleadas transformándose en Tripomastigotes sanguíneos para invadir otros tejidos (slenders),o ser ingeridos por el vector ( stumpys) , donde se transforman en epimastigotes. LOS TRIPOMASTIGOTES SON LOS QUE TIENEN CAPACIDAD INVASORA A TRAVES DE LA PICADURA DEL VECTOR O DE LA MUCOSA GASTRICA DEL VERTEBRADO. CHAGAS VIA ORAL : ciclo de vida del Tripanosoma Cruzi

3. CHAGAS VÍA ORAL • La interacción TM/Célula genera en la membrana parasitaria la expresión de TRANS-SIALIDASA y de PENETRINA. Estas NO determinan el ingreso a la célula ,lo que se logra mediante la acción de las GP 82-30 y 35/50. • Sociedad de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio - 29 10 10

4. CHAGAS VÍA ORAL • Se activan a continuación receptores del TGF B (factor transformador de crecimiento) y los B2 de la BRADICININA. Como consecuencia de ello se libera Ca+ intracelular en forma bidireccional provocando : a) en la célula el desalineamiento de las moléculas de actina y b) en el parasito permitiendo que éste reconozca a los receptores de membrana celulares a los que luego se unirá. • Sociedad de Cardiología de Neuquén – Dr. Enrique Bavio – Neuquén – 29 10 10

5. Chagas Vía Oral Se utilizaron ratones que fueron inoculados por vía digestiva con: a) tripanosomas metacíclicos normales--- (expresan GPs 82 y 30) b) otros tripanosomas modificados genéticamente para que no las expresen. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio Neuquén 29/10/10

6. Chagas Vía Oral Las GPs. 35/50 (SIMIL MUCINA), además de proteger al parásito del jugo gástrico haciéndolo resistente a la digestión, tienen como función adicional la de cooperar con las GP 82 y 30 para que puedan penetrar en las células de la mucosa gástrica desencadenando la liberación de Ca+ intracelular en forma bidireccional Tanto en ratones como en humanos los tripanosomas meta cíclicos modificados (NO EXPRESAN LAS GPS. 82 Y30) no resultaron infectantes , mientras que los que expresaban las GP 82 y 30, (NORMALES), fueron plenamente infectantes

7. Chagas Vía Oral LA INTERACCIÓN ENTRE EL PARÁSITO Y LA CÉLULA DE LA MUCOSA GASTRICA DISPARA EN AMBOS SEÑALES DE TRANSDUCCIÓN QUE GENERAN LA MOVILIZACIÓN DEL Ca+ INTRACELULAR • Corriente de Ca+ intracelular en células HeLa cuando se agrega extracto de epimastigote (carente de GP 82 -no infectante-) flecha negra (E)-------- y corriente de calcio en la misma célula cuando se agrega extracto de TM poseedor de gp82 (flecha roja). • Aumento del Ca+ intracelular , tras el contacto con células HeLa , logrado en el TM metacíclico y ausencia de respuesta en el epimastigote. • Sociedad de Cardiología de Neuquén Dr. Enrique Bavio 29-10-10

8. Chagas Vía Oral EN EL PARASITO: la movilización del Ca + es indispensable para que pueda RECONOCER A LOS RECEPTORES DE LA MEMBRANA CELULAR DEL EPITELIO GASTRICO Y LUEGO UNIRSE A ELLOS. La movilización de Ca+. Intracelular es mediada por la generación de Inositol-trifosfato. Esta ,es a su vez promovida mediante la tirosinkinasa activada, la fosfolipasa C y la fosforilación de una proteína ausente en los ratones modificados genéticamente. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio Neuquén 29/10/10

9. Chagas Vía Oral • EN LAS CELULAS MUCOSAS: la movilización de Ca+ desde los depósitos intracelulares se lleva a cabo mediante la Fosfoinositol 3 kinasa . Este proceso, después de provocar la desorganización del cito esqueleto de actina , produce un realineamiento de sus microfilamentos , facilitando la unión al parasito. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio Neuquén 29/10/10

10. Chagas Vía Oral • . Los Tripomastigotes metacíclicos cuando llegan al estómago se unen mediante la GP 82 a la mucina gástrica y luego abordan las células del epitelio. Esta unión parece ser selectiva ya que no se observa en las mucinas de otros epitelios del aparato digestivo alto (orofaringe y esófago), y de las glándulas submaxilares. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio Neuquén 29/10/10

11. LAS GLICOPROTEINAS Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio - Neuquén 29/10/10

12. Chagas Vía OralLAS GLICOPROTEINAS • La GP82 pertenece a la superfamilia de las trans sialidasas . Poseen una porción formada por hidratos de carbono que no esta involucrada en la unión a la célula gástrica y una secuencia de aminoácidos que muestra una afinidad del 100% con el sitio de unión de la célula blanco. Además la GP 82 parece tener afinidad por la mucosa gástrica. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio- Neuquén 29/10/10

13. Chagas Vía oral : las glicoproteínas Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio - Neuquén 29/10/10

14. Chagas Vía OralLAS GLICOPROTEINAS • La GP 30: También induce la movilización de Ca+ en la célula gástrica y en ausencia de GP82 permite la penetración de Tripomastigotes en la célula mucosa. • LOS TRIPOMASTIGOTES CARENTES DE GP 82 PENETRAN MUCHO MÁS LENTAMENTE QUE LOS QUE SI TIENEN DICHA GP. • PASADAS 12 Hs. DEL INGRESO A LAS CELULAS GASTRICAS LOS TRIPOMASTIGOTES HAN PASADO A LA FORMA AMASTIGOTE. ALLI INICIARÁN SU REPLICACIÓN Y………………………… A LAS 96 Hs. EXISTEN MUCHOS NIDOS DE AMASTIGOTES ENTRE LOS QUE POSEEN LA GP 82 PERO MUCHOS MENOS ENTRE LOS QUE CARECEN DE DICHA GP, HABIENDO INGRESADO MERCED A LA ACCIÓN DE LA GP 30.

15. Chagas Vía Oral : mucosa gástrica Múltiples nidos de amastigotes por parásitos que expresan la gp82 Escasos nidos de amastigotes por parásitos que no expresan la gp82 Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio- Neuquén 29/10/10

16. Chagas Vía Oral LAS GLICOPROTEINAS A PARTIR DE ÉSTA ETAPA DESAPARECEN LAS DIFERENCIAS EN LA REPLICACIÓN ENTRE LOS AMASTIGOTES QUE POSEEN LA GP 82 Y LOS QUE NO LA POSEEN. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio - Neuquén 29/10/10

17. Chagas Vía Oral • Los Tripomastigotes que carecen de la GP 82 expresan otra GP, (la GP 90) que actuaría como un regulador negativo de la invasión. • Esto parece confirmarse cuando se inoculan por vía oral Tripomastigotes metacíclicos que expresan las tres glicoproteínas por igual (GP 82, GP 30 Y GP 90). En este caso al 4° día de la inoculación tienen muy pocos nidos de amastigotes, baja o ninguna parasitemia y una sobrevida del 100% a los 30 días. En cambio cuando se inoculan Tripomastigotes que carecen de GP 90 y expresan normalmente las GPs 82 y 30, al 4° día tienen una enorme cantidad de amastigotes, desarrollan parasitemias elevadas muriendo los animales a los 30 días. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio - Neuquén 29/10/10

18. Chagas Vía Oral SUCEPTIBILIDAD DE LA GP 90 A LA DEGRADACIÓN POR EL JUGO GASTRICO La GP 90 es específica del estadio metacíclico y se le asigna un rol depresor de la capacidad de penetración del parásito DIFERENTES LINAJES DEL T. CRUZI MUESTRAN DIFERENTES GRADOS DE EXPRESIÓN DE LA GP 90 Y ESTO SE CORRELACIONA EN FORMA INVERSA CON LA CAPACIDAD INVASORA EN CULTIVOS CELULARES. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio - Neuquén 29/10/10

19. Chagas Vía Oral: Gp 90 sensible,y resistente a la acción de la pepsina

20. Chagas Vía oral • Incremento de la inefectividad del cepas Tripanosoma Cruzi que expresan moléculas de gp90 susceptibles a la digestión péptica. • Tras la infección oral los tripomastigotes metacíclicos de cepas productoras de gp90 pepsina sensibles expresan mucho menos estos inhibidores de invasión celular, de tal manera que pueden entrar a la célula blanco mas efectivamente. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio - Neuquén 29/10/10

21. Chagas Vía Oral • En contraste, los parásitos poseedores de moléculas gp90 pepsina resistente, se unen a las células blanco y envían señales inhibitorias a ambas células, dificultando la entrada del parasito. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio - Neuquén 29/10/10

22. Chagas Vía Oral • En el 2006 una publicación demuestra que dos linajes de T. Cruzi extraídos de un paciente en fase aguda de la enfermedad y que poseían la misma expresión de GPs 82, 30 y 90colocados en el laboratorio en contacto con células epiteliales digestivas mostraron baja capacidad de penetración. Los mismos linajes administrados por vía oral a ratones se comportaron de diferente forma. Uno de los linajes demostró elevada capacidad invasora y el otro no. -Los más invasores desarrollaron parasitemia en el 30 % de los casos y los ratones murieron a los 30 días. - El otro linaje no desarrolló parasitemia y no murió ninguno de los animales inoculados. A los dos grupos de animales se les tomaron muestras de jugo gástrico después de 1 hora de la ingesta. Investigados los parásitos recuperados de los estómagos : se pudo observar que en los animales que luego tuvieron peor pronóstico la GP 90 había sido degradada por el jugo gástrico dejando en libertad a las GPs 82 y 30 , mientras que en los animales que tuvieron mejor evolución la GP 90 no había sido digerida. Las otras GPs. (82 y 30) no fueron afectadas por la digestión.

23. Chagas Vía Oral • El caso brasilero del año 2005 ocurrido en la localidad de Santa Catarina , ocasión en la que hubo 3 muertos , dio lugar a que este linaje de T. Cruzi fuera llamado SC. En los estudios inVitro los Tripomastigotes SC mostraron baja capacidad infectiva y conservaron la expresión de las tres glicoproteínas, pero cuando se los inoculaba por vía oral y una hora después de la ingesta, eran recuperados, se hallaron intactas las GPs. 82 y 30 , pero había desaparecido la GP 90, que tiene efecto depresor de la capacidad infectiva. Soc. de Cardiología de Neuquén- Dr. Enrique Bavio - Neuquén 29/10/10

24. Chagas Vía Oral ¡¡¡Muchas gracias!!!